溞类是枝角类（Cladocera）的通称，在分类上属节枝动物门（Arthropoda)，甲壳动物纲（Crustacea),鳃足亚纲（Branchiopoda)，双甲目（Diplostraca)，枝角亚目（Cladocera)。溞类广泛分布在淡水中，海水中种类较少。据调查，我国共有淡水溞类136种。溞类是水体中初级生产者（藻类）和消费者（如鱼类）之间的中间环节，能滤食水中碎屑和菌类，对水体自净起着重要作用，同时又是鱼类的天然饵料。

溞类繁殖快，生活周期短，培养简便，对许多毒物敏感，因此世界各国广泛使用溞类进行水生生态毒理学研究。

1．受试化学品必备资料

水溶解度 水溶液中的定量分析方法

蒸汽压 在水中和光中的化学稳定性

结构式 正辛醇／水的分配系数

纯度 快速生物降解试验结果

2．仪器设备

①溶解氧测定仪。

②水硬度计。

③体视显微镜。

④pH计。

⑤试验容器或装置。试验容器最好是全玻璃制品，或由其他化学惰性材料制成。容积适当，规格一致，便于清洗。

3．受试生物种

目前世界上用于毒性试验的搔类种类很多。常用的种类是：

大型溞DaphniamagnaStraus

蚤状溞DaphniapulexLeydig

隆线溞DaphniaCarinataKing

由于大型溞是溞科中个体最大的种类，体长可达6mm，生殖量多，是毒性试验使用最广的一种。国际标准ISO6341和我国国家标准GB/T16125-1995都把大型溞为准试验动物。

使用大型溞或其他适宜的溞类，试验开始时，溞龄应不超过24h。实验室繁殖、表观健康，有明确来历（繁殖方式、预培养）的溞种才可用于试验。

4．试验程序

(1）准备

①试验用水：适于培养溞类的任何水，不论是天然水或标准稀释水（见附录），都可用于测试试验。建议在试验前使用的培养水应与试验用水相似，以利于溞类的适应。

标准稀释水应容许溞类在其中生存至少48h，并尽可能检查稀释水中不含有任何已知对溞类有毒的物质，例如：氯、重金属、农药、多氯联苯等。

②受试物溶液的配制：取一定体积受试物的贮备液，加入稀释用水，定容，制备成实验要求浓度的试验液。

对于受试化学品贮备液的制备，可将已知量的受试物质溶于一定体积的稀释水中，贮备液应于当天配制。对于高稳定性物质，最多允许配制供2d使用的贮备液。
配制贮备液时，难溶于水的物质可用适当的方法将其溶解或分散，包括采用超声波装置和使用对溞低毒的有机溶剂、乳化剂和分散剂等物质，并应加设助溶剂对照试验。助溶剂对照组的溶剂浓度应为试验溶液中的最高浓度。

对于工业废水，以原水样为试验液（(100%)，用稀释水按百分数（百分率）配制各浓度。采集废水样品时，应将水样瓶充满水样不留空气，样品采集后应立即进行试验，尽可能缩短水样保存时间，如果样品采集后6h之内不能进行试验，则必须将水样在0-4℃保存。

对于工业固体废物，首先磨碎，按固液1：10比例加入去离子水，摇匀后浸泡24h,滤纸过滤。其溶解部分为被测工业固体废物的浸出原液（(100%)，再用稀释水按百分数配制成各浓度。

(2）试验操作

①预试验：在正式试验之前，先进行较大范围浓度系列（如1、10、100mg/L）的初步试验，为正式试验设置受试物的浓度提供依据。预试验中每个浓度放五只幼溞，持续时间24h（或48h)。用静态方式进行，不设平行组。

②正式试验：根据预试验的结果，在包括使溞全部产生活动抑制的最低浓度和未产生活动抑制的最高浓度之间以几何级数设置浓度系列。一般至少设五个浓度组，如2、4、8、16、32mg/L。最高试验浓度不应超过lg/L。必须设置空白对照。若使用助溶剂，尚应增设助溶剂对照组，其助溶剂用量同最高浓度组。

每个浓度组和对照组至少要用20只溞，最好分成四组，每组五只。试验期间不要喂食。最大负荷为1只溞/2ml试验液。试验温度应在（18-22)℃±1℃。光暗周期无特殊要求，建议毒性试验在自然光照或相当于自然光照下进行，每天照明10h左右。

稀释水在加入到受试物中之前曝气。试验开始和结束时，应测定对照组和试验液中溶解氧的浓度。

在试验开始和结束时，应测定对照组和试验液中的pH值。不可调节试验液中的pH值。如有条件，应测定受试物的实际浓度。

试验期间，经常观察溞类的活动与生存情况，应及时取出死溞。记录24h和48h溞类累计活动抑制数。最好出现0%、<50%、>50％和100％的溞类抑制的试验结果。

5．质量保证与质量控制

①试验结束时，试验溶液中的溶解氧浓度应高于空气饱和值的60%。

②试验结束时，对照组中活动受抑制搔数应少于10%。

③受试物实测浓度不能低于设置浓度的80%。

④定期测定参比物的24hEC50，以检查供试溞的敏感性。满足参比物重铬酸钾（分析纯）的24hEC50值≤2.0mg/L,溞敏感度符合要求。

6．数据与报告

（1)数据处理

用表格形式列出24h和48h对照组和各处理组试验搔个数、活动抑制溞个数及百分率。以受试物处理浓度为横坐标，死亡率为纵坐标，在计算机或对数一概率纸上作图，通过图解内插法或计算法求出24h和48hEC50估计值，并计算95％的置信限。

(2）结果评价

溞类的毒性可按以下标准分级。

(3）编写报告

报告应包括：试验名称、目的、试验原理、试验的准确起止日期，以及：

1)受试物：对于化学品，其化学名称、其他名称（商品名等）、化学式、成分、来源（制造厂商等）、批号、纯度等级以及理化性质等；对于废水、废渣等环境样品，其来源、采样地点、采样时间等。

2）试验用溞：溞类名称、来源、预培养、繁殖方式（包括食物来源、种类和数量、喂食频次）、溞龄、健康状况等。

3)试验条件：

①使用的助溶剂、添加剂及其浓度。若观察到试验溶液不能保持均一和稳定，对结果的解释应慎重，并注明这些结果不能重复。

②稀释水：来源、理化特性，包括硬度、pH值、Ca/Mg、Na/K、碱度等。

③试验温度。

④光、暗周期。

⑤最好用表格列出试验期间pH值和溶解氧的全部测定值。

⑥若使用参比物，记录其测试结果和数据。

⑦试验容器：容积、质地、密闭方式、溶液体积，每个容器中受试生物的数量，每个浓度测试容器的数量，试验容器的处理，受试物在稀释水中的引入。

⑧试验液的更换情况，更换顺序及方案、流动情况，受试物的输送系统及流速。

⑨受试物的实测浓度与测定日期。

4）试验结果：

①搔类无活动抑制（EC0）的最高浓度。

②100%溞产生活动抑制（EC100）的最低浓度。

③24h、48h时的每个浓度的累计死亡率。

④24h、48h时的EC50，及其95％的置信限。

⑤浓度一抑制率曲线图。

⑥对照组抑制率。

⑦试验期间，可能会影响试验结果的隐患。

⑧对照组和浓度组搔类的其他异常反应。

⑨如果进行参比物试验，报告试验结果。

5）结果讨论。

附录

标准稀释水的配制

新配制的标准稀释水pH值为7.8±0.2，硬度为250mg/L士25mg/L（以CaCO3计）Ca/Mg的比例接近4:1,溶解氧浓度在空气饱和值的80％以上，不含有任何对大型搔有毒的物质。人工稀释水用电导率≤l0S/cm(1mS/m）的蒸馏水或去离子水（以下简称水）按下述方法制：

①氯化钙溶液：将11.76gCaCl2·2H2O溶解于水中，并稀释至1L。

②硫酸镁溶液：将4.93gMgSO4·7H2O溶解于水中，并稀释至1L。

③碳酸氢钠溶液：将2.598NaHCO3溶解于水中，并稀释至1L。

④氯化钾溶液：将0.23gKC1溶解于去离子水中，并稀释至1L。

取以上四种溶液各25m1加以混合并用水稀释至1L。必要时可用氢氧化钠溶液或盐酸溶液调节pH值，使其稳定在7.8±0.2。