滤膜是一种微孔性薄膜。将水样注入已灭菌的放有滤膜（孔径0.45μm）的滤器中经过抽滤，细菌即被截留在膜上，然后将滤膜贴于品红亚硫酸钠培养基上，进行培养。一大肠菌群细菌可发酵乳糖，在滤膜上出现紫红色具有金属光泽的菌落，计数滤膜上生长，此特性的菌落数，计算出每1L水样中含有总大肠菌群数。如有必要，对可疑菌落应进；涂片染色镜检，并再接种乳糖发酵管做进一步鉴定。

滤膜法具有高度的再现性，可用于检验体积较大的水样，能比多管发酵技术更快地得肯定的结果。不过在检验混浊度高、非大肠杆菌类细菌密度大的水样时，有其局限性。多管发酵法和滤膜法的结果作统计学比较，可显示出后者较为精密。虽然从这两种技术所得到的数据都提供了基本相同的水质情报，但检验结果的数值不同。在做水源水的检验时，可以预期约有80％的滤膜试验的数据落在多管发酵试验数据95％的置信界限内。

1．培养基

①品红亚硫酸钠培养基（滤膜法用）。

②乳糖蛋白陈培养液。

③乳糖蛋白胨半固体培养基。

2．步骤

（1)过滤水样

①滤膜及滤器的灭菌：将滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水，置于沸水浴中煮沸灭菌三次，每次15min。前两次煮沸后需更换水洗涤2-3次，以除去残留溶剂。也可用121℃灭菌10min, 10min一到，迅速将蒸汽放出，这样可以尽量减少滤膜上凝集的水分。滤器、接液瓶和垫圈分别用纸包好，在使用前先经121℃高压蒸汽灭菌30min。滤器灭菌也可用点燃的酒精棉球火焰灭菌。

②过滤装置安装：以无菌操作把滤器装置装好。

③水样量的选择：待过滤水样量是根据所预测的细菌密度而定的，对总大肠菌群做滤膜试验应过滤水样的参考体积。一个理想的水样体积，可以产生大约50个大肠菌群细菌菌落，而全部类别的菌落数则不超过200个。当过滤水样（稀释的、或未稀释的）体积少于20m1时，应在过滤之前加少量的无菌稀释水到过滤漏斗中，以便水量的增加有助于悬浮的细菌均匀分布在整个过滤表面。

④过滤：用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘，将粗糙面向上，贴放在已灭菌的滤床上，稳妥地固定好滤器。将适量的水样注入滤器中，加盖，开动真空泵即可抽滤除菌。

(2）培养

水样抽滤完后，再抽约5s，关上滤器阀门取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在品红亚硫酸钠培养基上，滤膜截留细菌面朝上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡。然后将平皿倒置，放入37℃恒温箱内培养24h。培养期间，保持充足的湿度（大约90％相对湿度）。

3.结果观察和报告

挑选符合下列特征的菌落进行革兰氏染色、镜检。

紫红色，具有金属光泽的菌落；深红色，不带或略带金属光泽的菌落；淡红色，中心色较深的菌落。

凡系革兰氏阴性无芽孢杆菌，需再接种于乳糖蛋白陈培养液或乳糖蛋白膝半固体培养基（接种前应将此培养基放入水浴中煮沸排气，冷却凝固后方能使用），经37℃培养，前者于24h产酸产气；或后者经6-8h培养后产气，则判为总大肠菌群阳性。计数滤膜上生长的大肠菌群菌落总数，根据过滤的水样量计算1L水样中总大肠菌群数。

总大肠菌群数（个／L)= 滤膜上生长的大肠杆菌菌落数×1000/过滤水样量（ml)

滤膜上菌落数以20-60个/片较为适宜。