三、实验用水制备设备或仪器

细胞培养实验室与其他实验室一样，也需要自来水、蒸馏水（或反渗透水、去离子水）。但是，由于动物细胞和人的肿瘤细胞、正常细胞等的培养对水的要求非常高，就是说，水中如果含有稍微多的金属离子，尤其重金属离子，细胞容易坏死或凋亡，因此，细胞培养用培养基的配制、培养用器皿的清洗等，都必须使用到高纯水以上的水。

（一）普通纯化水制备仪器或设备

1.蒸馏水器

制备蒸馏水的仪器。指以自来水为进水，通过电热管直接加热，经过冷凝收集得到的水。

2．反渗透水装置

指以自来水为进水，经过高纯水器中活性炭、反渗透膜环节制备出来的水。

3．去离子水装置

阴阳离子交换树脂柱装置。指以自来水为进水，经过阴阳离子交换树脂柱装置制备、收集得到的水。

（二）高纯水和制备仪器或设备

1．双蒸馏水器

自来水进水时制备的水为双蒸水，也称重蒸水。以普通纯化水如去离子水、蒸馏水、反渗透水为进水时可制备三蒸水。

2．高纯水器

指以自来水为进水，经过高纯水器中活性炭、反渗透膜等各个环节制备出来的水。国产的品牌比较丰富（图6-7)。

3．亚沸水蒸馏器

以蒸馏水、反渗透水或去离子水为进水，通过电热管非直接加热，水分子在80-90℃即发生蒸发，再经冷凝收集得到的蒸腾水。亚沸水一般无有机物残留。

4．超纯水器

或称超纯水机。有的是以自来水为进水，有的是以蒸馏水、反渗透水或去离子水为进水。有的带出水超滤、紫外消毒或热原去除等特性选配件。

四、洗消用仪器设备

（一）清洗用设施或设备、仪器

1．实验室水龙头

自来水出水口水嘴用20-40cm橡胶管连接，或用2层的纱布包裹成20-40cm长的导流嘴，方便用水的同时避免产生水流的溅射。

2．超声波清洗器

清洗时，可横卧loml移液管、立放试剂瓶。一般选购20L以上容量的超声波清洗器。

3．移液管、长丝滴管自动冲洗器

清洗移液管和长丝滴管使用。

（二）干燥、灭菌和滤过除菌的设备或仪器

1．器皿的清洗、干燥、灭菌流程和培养用液滤过除菌

(1)适用高压蒸汽灭菌的玻璃器皿、金属器皿的洗消程序经过清洗后，需要先干燥，包装（移液管和长丝滴管加塞棉花，专用包装如不锈钢消毒筒或不锈钢餐盒或铝合金餐盒等，外包装如牛皮纸、皱纹纸、锡箔纸等），然后灭菌，再转移到干燥箱中充分干燥，最后取出并转移到洁净间的柜子内存放。有时将经过清洗后的玻璃器皿、金属器皿等直接包装（移液管和长丝滴管加塞棉花，专用包装如不锈钢消毒筒或不锈钢餐盒或铝合金餐盒等，外包装如牛皮纸、皱纹纸、锡箔纸等），然后放高压蒸汽灭菌器内完成灭菌操作，再转移到干燥箱中充分干燥，最后取出并转移到洁净间的柜子内存放。

(2)能直接用干热灭菌的玻璃器皿、金属器皿的洗消程序在清洗后直接包装（移液管和长丝滴管加塞棉花，专用包装如不锈钢消毒筒或不锈钢餐盒或铝合金餐盒等，外包装如牛皮纸、皱纹纸、锡箔纸等），然后放电热恒温干燥箱内设定160℃并维持2h以上，或180℃维持lh以上完成灭菌操作，自然降温到40-50℃后取出，再转移到洁净间的柜子内存放。

(3)用多重消毒方法进行灭菌的细胞培养板、细胞培养瓶的洗消程序经过清洗后，塑料细胞培养板（下板和上盖配套，分立放置）和细胞培养瓶（瓶体和瓶盖配套，分立放置）的干燥一般是在超净工作台内依靠风淋过夜完成干燥，在超净工作台内使用75％乙醇浸泡5-l0s，然后转移到无水乙醇中浸泡5-l0s脱水，接着通过风淋使充分干燥，干燥后保持风淋开启状态直接用紫外线杀菌2h以上，最后用无菌操作方法配套旋紧培养瓶盖子或加盖培养板上盖。经过灭菌并套装好的塑料细胞培养板或细胞培养瓶需要用保鲜膜包装（每包5-10套）以便存放过程达到防尘目的，方便日后使用。

(4)气体灭菌仪器或设备气体灭菌设备是采用气体灭菌法原理设计的仪器或设备，如环氧乙烷灭菌器。原理上属于化学灭菌法的一种，是指采用气态杀菌剂（如臭氧、环氧乙烷、甲醛、丙二醇、甘油和过氧乙酸蒸汽等）进行灭菌的方法。该法尤其适合环境消毒以及不耐加热高温灭菌的细胞培养器皿、医用器具、设备和设施的消毒。

(5)细胞培养用液的滤过除菌根据配方称量溶解的细胞培养用液，需要在超净工作台内按无菌操作要求，使用灭菌干燥的超滤器滤过除菌和分装。

2．高压蒸汽灭菌器

有蒸汽发生装置，容量需要70L以上，能产生100kPa以上的压力，可调节时间、温度。

发生蒸汽的水通常用去离子水、反渗透水、蒸馏水等，尽量避免直接用自来水，以免损坏仪器或在灭菌包装上留下水垢。

3．电热恒温干燥箱

适用于耐高温的器皿灭菌，如玻璃器皿、某些金属器皿的灭菌，灭菌温度在160-180℃，需要装配有风机以使箱内温度均匀，待温度到达设定温度后再关闭风机。

可用于清洗后器皿的干燥，或用于经过高压蒸汽灭菌的器皿的干燥，干燥温度一般选择50-70℃，同样需要装配有风扇以使室内温度均匀。

4．超滤器（除菌滤器）

用于液体如培养液、缓冲液等的滤过除菌时，首先需要将超滤器本身预先用高纯水进行有效清洗，装载0.22μm超滤膜，经过高压蒸汽灭菌并干燥，降温到室温后才能用于滤过。降温方式可选自然冷却方式，或选择水冷方式。水冷方式是，在超净工作台内组装好超滤器后，先滤过一定量（如100m1)的高纯水或超纯水，然后再滤过目标溶液。可使用正压空气滤过或负压滤过。滤过分装时无菌液体的收集均在超净工作台内按无菌操作要求完成。