[实验器材]

1．仪器

普通冰箱，恒温磁力搅拌器，高压蒸汽灭菌器，恒温烤箱，超净工作台，pH计。

2．材料与试剂

D-PBSA干粉或药片，超纯水，无菌试剂瓶（200或500ml),7.5%NaHCO3溶液，lmol/LHCl溶液，1mol/LNaOH溶液，酒精棉球，多层纱布，l000ml容量瓶，标签纸，记号笔。

[操作步骤]

1．配液前准备

(1)试剂瓶的清洗干燥准备足量的试剂瓶以便灭菌前分装D-PBSA溶液。

(2)超净工作台除尘、紫外消毒除尘后，开启风淋，照射紫外30.40min。直至培养液滤过分装结束前，不得关闭超净工作台的风淋。

2．组分溶解

(1)取1L包装的D-PBSA溶液组方的干粉或药片。

(2）在l000ml容量瓶内搅拌溶解。

(3）定容后，取溶液样品测定pH，并记录。调节pH为7.2-7.4。使用lmol/LHC1或lmol/LNaOH溶液调节pH,测试样品应丢弃，不要合并到原液中。

(4）充分搅拌1-2h。

3．分装灭菌

(1)将溶解充分的上述溶液分装到有刻度的试剂瓶内，旋上瓶盖，但保持有1圈不旋紧。瓶盖部分用2层锡箔纸包裹。

(2)用记号笔在瓶身上标记各瓶的液面，并贴上注明溶液名称、配制日期等信息的标签。

(3)121℃即0.1MPa灭菌20min。

(4)灭菌后，冷却至室温。在超净工作台内进行二次定容，补充灭菌超纯水使液面恢复至灭菌前标识的液面水平线。4℃保存。

[注意事项]

1．严格滤过分装时所用的无菌操作条件是否合理、齐全，滤过过程的操作是否严格无菌操作。

2．使用干粉或药片配制BSS溶液时，要检查包装完整性及使用有效期。

3．也可使用灭菌的超滤器滤过除菌替代高压蒸汽灭菌。