[实验器材]

1．仪器

电子分析天平，普通冰箱，恒温磁力搅拌器，高压蒸汽灭菌器，恒温烤箱，超滤器，超净工作台，pH计。

2．材料与试剂

AR级别以上的试剂或药片，超滤器连接套件，0.22μm孔径超滤膜，无菌试剂瓶（200或500m1)，酒精棉球，多层纱布，250ml烧杯，1000m1容量瓶，Hank's溶液组方所需AR级试剂，酚红（Ind),lmol/LHCl溶液，lmol/LNaOH溶液，7.5%NaHCO3溶液，称量纸，药匙，标签纸，记号笔，多层纱布。

[操作步骤]

1．配液前准备

(1)超滤器包装灭菌拆卸、清洗超滤器，加载1-2张0.22μm孔径超滤膜，重新组装超滤器。用8层纱布包裹，绑扎后置高压蒸汽灭菌器121℃灭菌20min。灭菌后，置恒温烤箱内50℃鼓风干操2h。

(2)试剂瓶的清洗灭菌准备足量的试剂瓶以便滤过后对Hank's溶液进行分装。

(3)超净工作台除尘、紫外消毒除尘后，开启风淋，照射紫外30.40min。直至培养液滤过分装结束前，不得关闭超净工作台的风淋。

2．称量溶解

(1)Hank's溶液组方：Na2HPO4·H2O0.069,KH2PO40.069,MgSO4·7H2O0.20g，葡萄糖1.00g,NaCl8.00g,KCl0.40g,NaHCO30.359,酚红0.02g（其中，溶解NaHCO3后，将称量好的酚红一起溶解，均匀后再转移到容量瓶），CaC120.149，加H2O至l000ml，过滤除菌或高压灭菌，分装后4℃保存。

(2)称量与溶解的顺序依据Hank's溶液组方进行。顺序称量，并记录，单独在250ml烧杯内搅拌溶解，然后合并到容量瓶内。

(3)所有组分称量、溶解、合并完成后，使用辅料镊在容量瓶外壁辅助，小心转移烧杯内的搅拌子到容量瓶内。

(4)定容后，取溶液样品测定pH，并记录。调节pH为7.2-7.4。使用lmol/LHCl或lmol/LNaOH溶液调节pH。测试样品应丢弃，不要合并到原液中。

(5）充分搅拌1-2h。

3.滤过分装

使用灭菌后的，预装有0.22μm孔径超滤膜的超滤器在超净工作台内进行滤过除菌，分装后，加写标识，然后4℃保存。

［注意事项]

1．严格滤过分装时所用的无菌操作条件是否合理、齐全，滤过过程的操作是否严格无菌操作。

2.Hank's溶液属于BSS，可以使用高压蒸汽灭菌。