北京普天同创生物科技有限公司
[实验器材]
1.仪器
电子分析天平,普通冰箱,恒温磁力搅拌器,高压蒸汽灭菌器,恒温烤箱,超滤器,超净工作台,pH计。
2.材料与试剂
干粉培养基,超滤器连接套件,0.22μm孔径超滤膜,无菌试剂瓶(200或500ml),酒精棉球,250ml烧杯,l000ml容量瓶,NaHCO3(AR),硫酸庆大霉素注射液,lmol/LHCl溶液,lmol/LNaOH溶液,7.5%NaHCO3溶液,多层纱布,称量纸,药匙,标签纸,记号笔。
[操作步骤]
1.配液前准备
(1)超滤器包装灭菌拆卸、清洗超滤器,加载1-2张0.22μm孔径超滤膜,重新组装超滤器。用8层纱布包裹,绑扎后置高压蒸汽灭菌器121℃灭菌20min。灭菌后,置恒温烤箱内50℃鼓风干燥2h。
(2)试剂瓶的清洗灭菌准备足量的试剂瓶以便滤过后对培养液进行分装。
(3)超净工作台除尘、紫外消毒除尘后,开启风淋,照射紫外30-40min。直至培养液滤过分装结束前,不得关闭超净工作台的风淋。
2.称量溶解
(1)根据RPMI1640干粉培养基的包装说明,称量NaHCO3,在250m1烧杯内搅拌溶解后,转移到容量瓶内。
(2)称量合适的抗生素,搅拌溶解后合并到容量瓶内。如取8×104-1×105U硫酸庆大霉素稀释,然后合并。
(3)溶解包装小袋内的全部培养基干粉,搅拌充分后,合并到容量瓶内。使用辅料镊在容量瓶外壁辅助,小心转移烧杯内的搅拌子到容量瓶内。
(4)测定pH,调节pH为7.2-7.4。使用lmol/LHCl或lmol/LNaOH溶液调节pH。也可使用7.5%NaHCO3溶液调节pH,或溶液中通入CO2气体调节pH。
(5)定容后,充分搅拌1-2h。
3.滤过分装
使用灭菌后的,预装有0.22pm孔径超滤膜的超滤器在超净工作台内进行滤过除菌,分装后,加写标识,然后4℃保存。
[注意事项]
严格滤过分装时所用的无菌操作条件是否合理、齐全,滤过过程的操作是否严格无菌操作。
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