不是所有的细胞都能驯化为悬浮培养细胞。通常贴壁依赖的正常二倍体细胞无法驯化为悬浮培养细胞，需借助微载体进行悬浮培养。贴壁依赖性不强或贴壁不依赖的细胞可驯化为悬浮细胞，如L-929和HeLa已有悬浮培养亚系。

具体新开始驯化细胞最需要的是耐心。同时使用专为悬浮培养细胞而改良的培养液是关键。可先从250m1至1000m1的转瓶开始驯化，或玻璃瓶加磁力搅拌子（50-100转），培养液加半满。改良的专用于悬浮细胞培养液，通常减掉钙离子、镁离子，避免细胞聚集成团。还需添加抑制泡沫形成剂。玻璃瓶需先进行硅化，防止细胞粘到玻璃壁上。

最初，细胞大部分会贴壁，或聚集成大团。随着传代，悬浮培养能存活的细胞传到新培养瓶中，随着时间延长，可筛选出不需贴壁、不会聚集成团的细胞群体。新细胞系与原细胞群体是不同的，可能丢失了或获得了新特性。