银杏内酯（包括内酯A、B、C）作为一类特异有效的血小板活化因子(platelet-aeti-vatingfactor）受体拮抗剂，近年来受到了世界各国药学工作者的广泛关注。由于这类化合物分子立体结构复杂，人工合成的技术难度大，目前仍以银杏叶作为提取银杏内酷化合物的主要来源。关于银杏离体培养产生内酯化合物的研究，尽管做了大量工作，但由于分析测试技术上的限制，银杏细胞培养中内酯含量分析尚有一定困难。通过采用细直径HPLC快速分析柱，检测到了愈伤组织培养物中银杏内酷A化合物。

1．色谱条件

色谱柱：HypersilODSZ23μm2.0mm（内径）×l00mm。流动相为甲醇-水(33：67)；柱温30℃；流速0.2mL/min。示差检测器：1.0×10-4RIU。

2．样品提取制备

称取1.0g干愈伤组织，置于50mL圆底烧瓶中，加10％甲醇溶液l0mL和少量沸石，回流提取3次，每次60min。趁热用布氏漏斗抽滤，合并滤液，用旋转蒸发器浓缩至干，残渣溶于5mL甲醇中，将溶液加入装有5g中性氧化铝的小色谱柱上（预先用甲醇装柱并冲洗），用甲醇洗脱，收集洗脱液25mL，浓缩并用N2吹干后，再用0.2-0.5mL甲醇溶液溶解，密封后置于50℃水浴中恒温60min，取出，供HPLC分析用。

3．结果与讨论

由于银杏内酯化合物是不挥发性的，在未衍生化前无法进行GC分析，同时它们在219nm处的微弱紫外吸收系数，易受其他杂质干扰，故也难以用特异性的灵敏的HPLC-UV方法检测，对于目前银杏内醋浓度仅为μg/g范围的离体愈伤组织、细胞悬浮培养物来说，受方法最低检测量等灵敏度因素限制，尚无法用常规的HPLC-RI分析方法来监控银杏内酯的生物合成。本试验通过采用直径为2.0mm的快速RP-HPLC分析柱，可节约大量流动相（流速0.2mL/min)，分析时间不到常规柱的1/2，银杏内酯A的最低检出限为0.012μg，从而使HPLC-RI方法分析检测离体愈伤组织、悬浮细胞培养物中的银杏内醋含量成为可能。按以上分析条件，经继代两代的银杏幼叶、种胚愈伤组织的高效液相色谱图上仍能看到明显的银杏内酯A峰，说明叶和种胚愈伤组织都能生物合成银杏内酯A化合物，其在叶愈伤组织中的含量要高于胚性愈伤组织，分别为48μg/g和12μg/g。