紫杉醇(Taxol）是从红豆杉属植物（Taxus）中分离得到的具有抗癌活性的二萜生物碱，研究表明紫杉醇的C-13侧链是其抗癌作用所必需的，而C-13位的酰基来自苯丙氨酸。由于红豆杉属植物资源十分有限，体内紫杉醇含量很低，而且生长非常缓慢，所以近些年人们一直在尝试用红豆杉属植物细胞培养技术生产紫杉醇。多数饲喂研究表明，在培养基中单独或同时加人芳香羧酸与芳香氨基酸（如苯丙氨酸、酪氨酸）可以提高紫杉醇及其前体巴卡亭的合成量。然而对培养细胞如何有效利用加入的前体物质皆未作进一步的研究。因而研究红豆杉培养细胞内这些氨基酸前体的含量变化对于搞清这些前体物质与紫杉醇合成的关系具有一定的意义。由于氨基酸具有紫外吸收，且毛细管电泳法具有高效、快速、进样量小，样品前处理简单等优点，因此建立了一种方便、准确的毛细管电泳直接测定在红豆杉培养细胞中游离芳香族氨基酸的含量的方法。

1．红豆杉细胞的悬浮培养和前体的添加

实验用细胞株来源于中国红豆杉（Taxuschinensis)，经实验室反复驯化的C42细胞系。细胞培养采用两步法：继代培养基为MS+6-BA0.5mg/L+2,4-D0.5mg/L+LH2g/L＋蔗糖30g/L,pH5.8；生产培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L＋蔗糖5%。取处于静止期的2L摇瓶（1L继代培养液）悬浮培养细胞，减压抽滤，按l0gFW/mL(FW为样品鲜重）接种于250mL三角瓶（生产培养基）中。黑暗培养，25±2℃，摇床转速120-130r/min。在细胞培养的15d添加Phe或Tyr,24h取样。

2．样品的提取

细胞样品用蒸馏水冲洗并抽滤干，冷冻干燥至恒重，精密称取100mg干细胞，加70％乙醇研磨，清洗研钵一并转入离心管约6mL，超声提取20min，离心取上清液；加70％乙醇2mL沉淀，超声l0min，离心取上清液；重复一次，合并上清液约l0mL。冷冻干燥后，以电泳缓冲液定容，以0.22μm尼龙膜超滤得供试样品。

3．电泳条件

电泳溶液：40mol/L磷酸缓冲液（pH10.46)；检测波长：200nm；压力进样：0.5psi×3s；恒压电泳：15kV；电泳时间：9min；电泳温度：20℃。分离通道：37mm×75μm（内径）未涂层石英毛细管（beckman)，长度30mm。第一次进样前分别以lmol/LNaOH、0.lmol/LNaOH、双蒸水和缓冲液冲洗毛细管，两次进样间分别以双蒸水、缓冲液冲洗毛细管。

4．测定结果

在优化的实验条件下，取前述供试样品稀释到适当浓度后进样测试，样品电泳图谱见图7-32。结果表明，采用毛细管电泳法在9min内三种氨基酸得到分离测定。色氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸的线性范围分别为2.50-250μmol/L(r=0.9962,RSD=2.52%)、1.25-250μmo1/L(r＝0.9966,RSD=2.12%）和2.50-250μmol/L(r=0.9940,RSD=2.93%)，苯丙氨酸回收率为96.8％±1.37%,酪氨酸回收率为99.2％±3.04%。