有机酸和核昔酸是一类在细胞代谢上极为重要的物质，它们几乎参与细胞的所有生化过程。近年来细胞的新陈代谢和通量研究已被广泛关注，通过分析细胞代谢物的某些成分，特别是重要代谢物成分的检测，对准确地阐明新陈代谢的途径有着非常重要的意义。离子色谱法因其分析速度快、灵敏度高、能实现多组分同时分离定量等优点，已经成为分析有机酸的有效方法。采用阴离子交换色谱和电导检测法，建立了优化的梯度洗脱程序，实现了7种有机酸和3种核昔酸的同时检测。

1．样品制备

取1mL发酵液置于2mL塑料离心管中，以6000r/min速度离心5min，固体沉淀于离心管底。取适量上清液，用水稀释100倍，稀释液过IC-RP柱除去蛋白、色素等有机杂质。经0.23μm滤膜过滤除去微米级悬浮物。IC-RP柱(1.0mL)使用前须先经5mL甲醇、10mL水活化，放置20min后使用。当样品溶液通过该柱时，前面3mL弃去，后面溶液待检测。

2．色谱条件

IonPacAS11-HC阴离子交换柱，包括分析柱（250mm×4mm）和保护柱(50mm×4mm)。采用KOH梯度淋洗，流速1.00mL/min，柱温30℃，进样体积25kL。梯度淋洗程序。

3．样品分析

将热纤梭菌胞外培养液样品按照上述方法进行前处理，在KOH梯度洗脱程序下，样品中有机酸和核苷酸得到了较好分离，峰形尖锐。得到的组分浓度分别为乳酸234.14mg/L、丙酸58.98mg/L、丙酮酸87.24mg/L、柠檬酸2500.68mg/L、AMP318.00mg/L、ADP757.80mg/L、ATP920.14mg/L。图7-40为测定热纤梭菌胞外培养液中有机酸和核昔酸的色谱图。

4.结果表明

采用IonPacASII-HC阴离子交换柱，KOH梯度洗脱，流速1.00mL/min,柱温30℃，进样体积25μL。方法的相对标准偏差为0.39%-4.69%，线性相关系数为0.9906-0.9996，加标回收率为80.71%-94.02%，方法可用于嗜热厌氧菌胞外培养液中有机酸和核苷酸的同时测定。