(1)原理  某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合、脱羧成乙酚甲基甲醇，后者在强碱环境下，被氧化为二乙酰，二乙酞再与蛋白胨中精氨酸所含的胍基结合，生成红色化合物，称VP(+）反应，VP试验也称为乙酞甲基甲醇试验。不产生红色化合物者为阴性反应。有时为了使反应更为明显，可加人少量含胍基的化合物，如肌酸等。

VP试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力，如丙酮酸大肠埃希氏菌和产气肠杆菌都能使葡萄糖产酸、产气；大肠埃希氏菌所产丙酮酸使培养基呈明显酸性。而产气杆菌却能使丙酮酸脱羧，生成中性的乙酰甲基甲醇。在碱性环境中乙酰甲基甲醇被氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的精氨酸听含的胍基结合，生成红色化合物。即产气肠杆菌VP试验为阳性反应，而大肠埃希氏菌为阴性反应。

(2)试验方法  常用方法有三种。

①奥梅拉(O’Meara)法：挑取新培养的待侧纯培养物少许接种于葡萄糖蛋白胨水培养基，于〔36±1)℃培养（48±2)h，培养液10ml、加O'Meara试剂（加有0.3％肌酸Creattne或肌酸醉Creatinine的40%氢氧化钠水溶液）1mL，摇动试管1-2min，静置于室温或(36±1)℃恒温箱。若4h内不呈现伊红即判定为阴性。亦有主张在48-50℃水浴放置2h后判定结果者。
加入O’Meara试剂后要充分混合，促使乙酞甲基甲醇氧化，使反应易于进行。

②贝立脱（Barritt)法：将试验菌接种葡萄糖蛋白胨水培养基。于（36±1)℃培养4d,培养液2.5mL、先加入5%α-萘酚乙醇溶液0.6mL，再加4d氢氧化钾水溶液0.2mL，摇动2-5min。阳性菌常立即呈现红色．若无红色出现，静置于室温或（36-1)℃恒温箱，如2h内仍不显现红色，可判定为阴性：试剂中加入400g;L氢氧化钾是为了吸收二氧化碳加入量少于0.2mL一且次序不能颠倒。若不加叽酸可将试管放人37℃温箱中保温15-30min．以加快反应速度。

贝立脱方法是相当敏感的，它可检出以前认为VP试验阴性的某些细菌。国内多采用贝立脱法。

③快速法：将0.5％肌酸溶液2滴放于小试管中，挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种环，接种于其中，加入5％α-萘酚3滴，40%氢氧化钠水溶液2滴．振动后放置5min，判定结果。不产酸的培养物不能使用。

(3）结果  培养基呈现红色：阳性（＋）。培养基不变色：阴性（一)。

(4)应用  本试验是肠道杆菌常用的生化反应试验，一般用于肠杆菌科各菌属的鉴别。主要用于区别大肠埃希氏菌和产气肠杆菌在用于芽孢杆菌和葡萄球菌等其他细菌检验时。通用培养基中的磷酸盐可阻碍乙酞甲基甲醇的产生，故应省去或以氯化钠代替之