本法参照GB 4789. 3-2010大肠菌群测定的第一法。

(1)检验程序大肠菌群MPN计数的检验程序见图3-6.

(2)测定原理

大肠菌群是一群36℃发酵乳糖产酸产气的无芽抱革兰氏阴性杆菌。为了使符合条件的菌生长而其他杂菌得到抑制，检验分初发酵和复发酵两步。初发酵使用LST肉汤，因其中含有月桂基硫酸钠，可以抑制葡萄球菌等革兰氏阳性菌生长，因含有乳糖，大肠菌群发酵乳糖会产气，其他革兰氏阴性菌会利用样品中的其他糖（如葡萄糖）产气，有的芽袍杆菌也会利用乳糖产气。因此要进行复发酵。复发酵时就没有样品中的糖了，而且配方中加了煌绿，因此也抑制了芽抱杆菌。只剩下发酵乳糖的产酸产气的无芽抱革兰氏阴性菌，即大肠菌群。但是在个别情况下，菌相复杂时，有的芽抱菌也在复发酵管产气。此时要划线到EMB平板，检查芽抱。

(3)操作步骤

①样品的处理与稀释：同菌落总数测定的国标方法。

②初发酵试验：每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白陈(LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量超过1mL，则用双料LST肉汤），(36±1)℃培养（24±2)h，观察倒管内是否有气泡产生，(24±2)h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培养至（48±2)h，产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。

③复发酵试验：用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于亮绿乳糖胆盐肉汤（BGLB)管中，(36±1)℃培养（48±2)h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。

④大肠菌群最可能数（MPN）的报告：按确证的大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表，报告每克（每毫升）样品中大肠菌群的MPN值。