721型分光光度计是分光光度法在可见光谱区范围（360一800nm）内，进行定量分析常用的仪器之一。分光光度法以物质对光的选择性吸收为根据，以朗伯-比尔定律（A＝ Kbc）为基础来进行定量测定。

1.721型分光光度计的结构和工作原理

721型分光光度计由光源、单色器、吸收池和监测系统四大部分组成，全部装成一体，其结构如附图1.5(a）所示。

721型分光光度计的光学系统如附图1.5(b)所示。

721型分光光度计采用自准式光路，单光束。利用12V25W钨丝白炽灯泡作光源。由光源1发出连续辐射线，经聚光透镜2和反射镜7后，成为平行光束，经入射狭缝6及准直镜4反射到单色光器（721型分光光度计的单色光器是棱镜）3，经棱镜色散后的光反射至准直镜4，再经狭缝6，聚光透镜9，变成平行的单色器照射到样品池（比色皿）10，经样品池吸收后透过的光照射到光电管13上，光电管受光进行光电转换产生光电流，经放大器放大后输送至检流计，由表头直接显示出透光率（T%）或吸光度（A)。

准直镜4装在可旋转的转盘上，由波长调节器控制，转动波长调节器时，利用阿基米得螺线凸轮可带动准直镜转盘转动，从而可在出射狭缝后面得到所需波长的单色光。通过调节出射狭缝6的宽度，就可获得适合测量的光强。

2．仪器的安装及使用前检查

①仪器应安装在干燥房间内，使用时应放置在坚固平稳的工作台上。室内光线不宜太强，夏天不能用电风扇直吹仪器，以防灯泡灯丝发光不稳而影响测量。

②在未接上电源前，应对仪器的安全性进行检查。电源线应牢固，通地要良好，各旋钮的起始位置应正确。

③检查放大器及单色器的两个矽胶干燥筒，如受潮变色（干燥时为蓝色，受潮后变红色），应予更换（在仪器底部的干燥筒，可侧竖仪器来检查或更换）。

④仪器在未接通电源前，电表必须位于“0"刻线，否则要利用电表上的校正螺丝调至“0"处。

3．仪器的操作方法

721型分光光度计外形如图1.5(c）所示。

①先进行“使用前检查”，一切正常后，打开比色池暗箱盖7，接通电源6，预热约20 min。

②调节波长选择旋钮（λ)2至所需波长，灵敏度调节钮1放在“1”位置。调节“0"电位器3,校正电表8指针指0。

③将装有参比溶液及待测溶液的比色皿按顺序放入比色架上，使参比溶液处于光路位置，轻轻盖上比色皿暗箱盖，使光电管受光，调节“100%”电位器4至电表指针达满刻度（T100％或A＝0）处。

④如果放大器灵敏度不合适（即③中不能调满刻度），可重新调整灵敏度调节旋钮（放大器灵敏度有三挡，是逐步增大的，“1”最低，其选择原则是保证能使空白时调满刻度，尽可能采用灵敏度较低挡，这样仪器将有更高的稳定性），如果灵敏度不够，可逐渐升高，但改变灵敏度后，必须按③重新校正“0"和“100%"。

⑤按③连续调整“0"和“100%"，直至稳定。至此调校完毕，即可进行测定工作。

⑥轻轻拉动比色皿架拉杆5，使待测液置于光路位置，即可读取表头指针所指的读数（T%或A值）。

⑦测量完毕，打开比色皿暗箱盖。

⑧实验结束，关闭电源，将比色皿取出洗净，用软纸擦净比色皿架及暗箱盖，盖上暗箱盖，散热后，罩好仪器罩。

4．注意事项

①使用721型分光光度计时，连续光照光电管的时间不可太长，以避免光电管疲劳。不测定时，必须打开暗箱盖，切断光路，以延长光电管的使用寿命。

②根据需要选择使用不同厚度的比色皿，同一厚度的一套比色皿应检查使用。方法是使一套比色皿盛装同一种有色溶液，测其透光率相对值，该值最大相差不应超过0.5%。

③拿取比色皿时，只能用手捏毛玻璃面，切不可用手捏透光面，以免污损而影响透光性能。比色皿外壁的水珠应用镜头纸或柔软的吸水纸轻轻揩擦，不可用硬纸或用力擦拭。

④比色皿盛装溶液时，以装满2/3为宜，不可过满或太浅，以防拉动比色皿架时溅出或影响测定。对系列溶液的测量，应按从稀到浓的顺序依次进行，以减小误差。

⑤比色皿应用盐酸-乙醇（(1:2)混合液或1:1HN0₃溶液浸泡，再用自来水，蒸馏水洗涤，不可用碱液、氧化性强的洗涤液（如铬酸洗液）洗涤，以防腐蚀或造成粘接缝开裂。也不能用毛刷洗，以免损坏其透光面，更不能在炉子、火焰上或烘箱内加热干燥。

⑥在分析工作中，根据有色溶液的浓度的大小选用合适规格的比色皿，以使溶液吸光度控制在0.2一0.8范围内，以减小测量误差。