4.1检测程序

志贺氏菌检验程序如图4-10。

4.2检验过程

有人经过试验证明由磷酸缓冲液、胰胨、葡萄糖、lg/L的吐温80、新生霉素组成的志贺氏菌增菌液可使热受伤的福氏志贺氏菌得到完全修复。

ISO采用了此方法中使用的志贺氏菌增菌液为增菌液，添加新生霉素为抑制剂，培养时间改为16-20h。新生霉素抑制许多革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长，但对志贺氏菌的生长影响较弱。

在有些方法（FDA）宋内氏增菌液中添加0.5ug/mL新生霉素并以44℃培养，其余志贺氏菌增菌液中添加0.3ug/mL新生霉素并以42℃培养来提高选择性。这里全部统一为0. 5ug/mL新生霉素。另外在增菌过程中采取厌氧培养，以利用同大肠埃希氏菌竞争（志贺氏菌在厌氧培养时可与大肠埃希氏菌竞争）。

在此增菌液中生长的菌一般有大肠埃希氏菌、志贺氏菌、哈夫尼亚菌和普罗威登氏菌等。经20h的充分增菌后，用低选择性的麦康凯琼脂、中选择性的XLD琼脂和高选择性的HE琼脂作为选择性培养基。挑选可疑菌落接种到三糖铁琼脂和葡萄糖半固体琼脂。挑选底层黄色、斜面红色、不产气（不发酵乳糖和蔗糖，发酵葡萄糖产酸不产气，福氏6型产少量气体）、无动力的菌株做进一步生化试验和血清学试验。如表4-13。

注：＋，阳性；一，阴性；V，菌株间有差异或血清型间有差异；％为阳性率；①有些福氏志贺氏菌2a型菌株及鲍氏志贺氏菌9型产酸；②有些福氏志贺氏菌4型及6b型不产酸；③接种数日后宋内氏志贺氏菌产酸；④痢疾志贺氏菌和鲍氏志贺氏菌有些血清型及福氏志贺氏菌6型为阴性；⑤有些福氏志贺氏菌和鲍氏志贺氏菌13型和14型产酸并产气；⑥痢疾志贺氏菌1型和鲍氏志贺氏菌13型总是阳性；⑦痢疾志贺氏菌5型和福氏志贺氏菌6型为阳性；⑧痢疾志贺氏菌8型和10型为阳性，4型和6型可变；⑨只有鲍氏志贺氏菌13型为阳性。

此次标准列出的志贺氏菌血清型如下。

①痢疾志贺氏菌A 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13。

②福氏志贺氏菌B la, lb, 2a, 2b, 3a, 3b, 3c, 4a, 4b, 5a, 5b, 6, X, Y。

③鲍氏志贺氏菌C 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15,16,17，18。

④宋内氏志贺氏菌D1。

说明：在血清反应时群抗体（A, B, C, D）可能含有微量与其他交叉反应的抗原。可通过凝集吸收试验和（或）稀释到规定的水平来避免。

有的种，尤其是痢疾志贺氏菌具有荚膜抗原可能阻碍O抗原凝集，可通过100℃加热15-60min去除。

宋内氏志贺氏菌抗原存在于粗糙型和光滑型。与其他志贺氏菌抗体没有交叉反应。不像其他肠杆菌科细菌，粗糙型宋内氏志贺氏菌不需自凝试验。宋内氏志贺氏菌没有荚膜抗原。

血清学反应阳性而生化性状不符合时判为志贺氏菌阴性（与埃希氏菌有交叉反应）。

目前还没有好的志贺氏菌的检验方法。该菌许多生化性状为阴性，说明不活跃。也说明一些重要性状尚未被发现。另外尚未找到好的选择剂刺激其生长，因此与其他菌竞争时占劣势。少量志贺氏菌就能使人食物中毒，但没有好的分离方法，成为世界性的难题。