(1）原理

水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48 h后，所得1 ml水样所含菌落的总数。

(2）培养基与试剂

营养琼脂

成分：

蛋白胨l0g

牛肉膏3g

氯化钠5g

琼脂10～20 g

蒸馏水1 000 ml

制法：将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7.6，分装于玻璃容器中（如用含杂质较多的琼脂时，应先过滤），经103.43 kPa (121℃）灭菌 20 min，储存于冷暗处备用。

(3）步骤

以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1 ml充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15ml已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。

待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36℃±1℃培养箱内培养48 h，进行菌落计数，即为水样1 ml中的菌落总数。
以无菌操作方法吸取1 ml充分混匀的水样，注入盛有9 ml灭菌生理盐水的试管中，混匀成1：10稀释液。

吸取1：10的稀释液1 ml注入盛有9 ml灭菌生理盐水的试管中，混匀成1：100稀释液。按同法依次稀释成1：1000, 1：10 000稀释液等备用。如此递增稀释一次，必须更换一支1 ml灭菌吸管。用灭菌吸管取未稀释的水样和2～3个适宜稀释度的水样1 ml，分别注入灭菌平皿内。

以下操作同上。

(4）菌落计数及报告方法

作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。在求同一稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数。然后再求该稀释度的平均菌落数。

不同稀释度的选择及报告方法：

首先选择平均菌落数在30～300之间者进行计算，若只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。

若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视二者之比值来决定，若其比值小于2应报告两者的平均数。若大于2则报告其中稀释度较小的菌落总数。若等于2亦报告其中稀释度较小的菌落数。

若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，则应以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

若所有稀释度的平板上均无菌落生长，则以未检出报告之。

如果所有平板上都菌落密布，不要用“多不可计”报告，而应在稀释度最大的平板上，任意数其中2个平板1 cm²中的菌落数，除以2求出每平方厘米内平均菌落数，乘以皿底面积63.6 cm²，再乘其稀释倍数作报告。

菌落计数的报告：菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算，为了缩短数字后面的零数也可用10的指数来表示。