(1）原理

滤膜是一种微孔性薄膜。将水样注入已灭菌的放有滤膜（孔径0.45 um）的滤器中，经过抽滤，细菌即被截留在膜上，然后将滤膜贴于M-FC培养基上，44.5℃温度下进行培养，计数滤膜上生长的此特性的菌落数，计算出每升水样中含有粪大肠菌群数。

(2）培养基和试剂

本标准所用试剂除另有注明外，均为符合国家标准的分析纯化学试剂；实验用水为新制备的去离子水。

M-FC培养基：

成分：胰胨l0g

蛋白胨5g

酵母浸膏3.0 g

氯化钠5.0 g

乳糖12.5 g

胆盐三号1.5g

1％苯胺蓝水溶液10 ml

1％玫瑰色酸溶液（溶于0.2 mol/L氢氧化钠液中）10 ml

蒸馏水1 000 ml

制法：将上述培养基中的成分（除苯胺蓝和玫瑰色酸外），置于蒸馏水中加热溶解，调节pH为7.4，分装于小烧瓶内，每瓶100 ml，于115℃灭菌20 min.贮于冰箱中备用。临用前，按上述配方比例，用灭菌吸管分别加入己煮沸灭菌的1％苯胺蓝溶液Iml及新配制的1％玫瑰色酸溶液（溶于0.2 mol/L氢氧化钠液中）1 ml,混合均匀。加热溶解前，加入1.2％～1.5％琼脂可制成固体培养基。如培养物中杂菌不多，则培养基中不加玫瑰色酸亦可。

培养基的存放：在密封瓶中的脱水培养基成品要存放在大气湿度低、温度低于30℃的暗处，存放时应避免阳光直接照射，并且要避免杂菌侵入和液体蒸发。当培养液颜色变化，或体积变化明显时废弃不用。

(3）步骤

水样量的选择：水样量的选择根据细菌受检验的特征和水样中预测的细菌密度而定。如未知水样中粪大肠菌的密度，就应按所列体积过滤水样，以得知水样的粪大肠杆菌密度。先估计出适合在滤膜上计数所应使用的体积，然后再取这个体积的1/10和10倍，分别过滤。理想的水样体积是一片滤膜上生长20～60个粪大肠菌群菌落，总菌落数不得超过200个。

滤膜及滤器的灭菌：将滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水，置于沸水浴中煮沸灭菌三次，每次15 min。

前两次煮沸后需更换水洗涤2～3次，以除去残留溶剂。也可用121℃灭菌10 min,10 min一到，迅速将蒸汽放出，这样可以尽量减少滤膜上凝集的水分。滤器、接液瓶和垫圈分别用纸包好，在使用前先经121℃高压蒸汽灭菌30 min。滤器灭菌也可用点燃的酒精棉球火焰灭菌。

过滤：用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘，将粗糙面向上，贴放在已灭菌的滤床上，稳妥地固定好滤器。将适量的水样注入滤器中，加盖，开动真空泵即可抽滤除菌。

培养：使用M-FC培养基。培养基含或不含琼脂，不含琼脂的培养基使用已用M-FC培养基饱和的无菌吸收垫。将滤过水样的滤膜置于琼脂或吸收垫表面。将培养皿紧密盖好后，置于能准确恒温于44.5℃±0.5℃的恒温培养箱或恒温水浴中，经24 h±2h培养。若用恒温水浴培养，则需用防水胶带贴封每个平皿，将培养皿成叠封入防水塑料袋或容器内，浸没在44.5℃±0.5℃恒温水浴中。在培养时间内，装培养皿的塑料袋必须用重物坠于水面之下，以保持所需的严格温度。所有已制备的培养物都应在过滤后30 min内浸入水浴内。

(4）结果的计算

粪大肠菌群菌落在M-FC培养基上呈蓝色或蓝绿色，其他非粪大肠菌群菌落呈灰色、淡黄色或无色。正常情况下，由于温度和玫瑰酸盐试剂的选择性作用，在M-FC培养基上很少见到非粪大肠菌菌落。必要时可将可疑菌落接种于EC培养液，44.5℃±0.5℃培养24 h±2h，如产气则证实为粪大肠菌群。

计数呈蓝或蓝绿色的菌落，计算出每升水样中的粪大肠菌群数。

粪大肠菌群菌落数（个/L)＝滤膜上生长的粪大肠菌群菌落数X 1000/过滤水样量（m1)