以麻疹病毒（measles virus）为例，介绍病毒接种的基本方法。本实验可用于病毒增殖，也可用于标本中病毒的分离培养。

【材料】

1．病毒标本分离麻疹病毒常用咽喉拭子、脑脊液或尸检脑组织等，标本加双抗（青、链霉素）置4℃过夜；增殖病毒时可用麻疹病毒悬液做本试验。

2．细胞多种细胞均可用于麻疹病毒的分离培养。兔肾、人胚肾或猴肾等原代细胞对麻疹病毒最敏感；人羊膜细胞株或Vero等传代细胞也可用于麻疹病毒的分离。本实验以Vero细胞为例。

3．细胞生长液含10％胎牛血清（fetal calf serum, FCS）的RPMI 1640或MEM培养液。

4．维持液含2% FCS的RPMI 1640或MEM培养液。

5．消化液0.02% EDTA或0.25％胰蛋白酶，或0.02% EDTA和0.25％胰蛋白酶1:1混合液。

6. Hanks液。

7．无菌吸管（5 ml和1m1)、培养瓶（5 ml和10ml)，移液器及无菌移液吸头等。

【方法】

1．单层细胞培养倒置显微镜下选择生长成层的Vero细胞一瓶，用室温的0.02%EDTA或0.25%胰蛋白酶消化细胞5～15分钟后倒掉，加入2倍量含10% FCS的MEM（或RPMI 1640)生长液吹打细胞，使细胞分散，分装成两瓶，盖时不要太紧，37℃,5% CO₂孵箱培养24～48小时，细胞即可形成单层，此时接种病毒最适宜。

2．接种病毒取病毒悬液（可根据原效价进行一定倍数稀释）或采集的标本液接种于单层细胞培养瓶内，若5 ml培养瓶则每瓶接种0.2m1，同时设一瓶正常细胞对照（加0.2ml Hanks液替代待检病毒液）。37℃吸附1小时，每15分钟摇动1次，使病毒液均匀接触细胞。吸附后的待检病毒液弃去（亦可不弃），加入适量维持液，置37℃,5% CO₂孵箱培养，逐日观察细胞病变情况。

【结果】

大多数病毒在细胞内增殖后，能引起细胞病理变化，称为致细胞病变效应（cytopathogenic effect, CPE )，不需染色，可直接显微镜观察。病毒种类不同，产生的病变特点也不同，麻疹病毒CPE特点是细胞肿胀变大、集聚成团，细胞融合形成多核巨细胞，胞内、核内均可出现嗜酸性包涵体（图8-1）。

【注意事项】

1．观察细胞病变的情况是检测病毒的常用方法。不同病毒引起细胞的病变不同，例如：副粘病毒（如麻疹病毒、合胞病毒等）和疱疹病毒能引起细胞融合，形成多核巨细胞，也可出现包涵体；肠道病毒和腺病毒病变特点是细胞圆缩集聚成团，细胞折光性增强，死亡脱落。根据选择的细胞类型、细胞病变的种类可对标本中感染的病毒进行初步判定。但有些病毒虽然在培养细胞中增殖，却不引起明显的细胞病变。

2．分离培养的病毒毒力的检测通常采用50％组织细胞感染量（TCID50）或蚀斑形成（PFU）试验。

3．病毒的特异性检测需要将增殖的病毒用特异性抗体进行中和试验或ELISA等方法进行进一步鉴定。