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细胞培养技术在病毒学方面的应用比较广泛,这是由于病毒必须在活细胞内才能增殖,因此利用细胞培养方法得以了解病毒的生物学性状、致病机制以及对病毒性疾病诊断和制备疫苗等,促进了病毒学的飞速发展。现将细胞培养在增殖或分离鉴定病毒、病毒性感染的血清学诊断、体外抗病毒药效检测、肿瘤病毒致癌机制及病毒疫苗研制等方面的主要应用介绍如下。
增殖和分离鉴定病毒
对病毒感染性疾病的微生物学诊断、对新分离的病毒进行鉴定以及制备疫苗等均需要增殖病毒或分离鉴定病毒。
最早利用细胞培养技术来增殖病毒的是Maitland,他于1928年创立组织片培养法。不同种类的病毒一般均有敏感的细胞株,在敏感细胞株上病毒增殖快且增殖的指标明显。最主要的增殖指标是由Enders等确立的,即通过观察细胞病变来判定。如果有病毒增殖,在光学显微镜下就能观察到细胞变圆、坏死并从瓶壁脱落等现象,故称其为细胞病变效应(cyto-pathic effect, CPE)。CPE往往随病毒种类和所用细胞种类不同而异,这些变化在一定条件下比较稳定,因此可根据有特征的CPE对某些病毒进行初步的鉴别。有些病毒可在培养细胞内形成包涵体、融合细胞、多核巨细胞以及细胞代谢引起培养液pH变化,这些变化均可作为鉴定病毒和病毒增殖的指标。
对病毒性疾病的病因学诊断,最可靠的方法是从标本中分离并鉴定出致病性病毒体。由于病毒具有严格的细胞内寄生性,对病毒的分离培养必须选用敏感的活细胞,包括动物、鸡胚和细胞培养。目前被广泛采用的方法就是细胞培养法分离鉴定病毒。
一、用于病毒分离的细胞种类
由于不同种类病毒对细胞的敏感性不同,所以首先应根据病毒的种类选择敏感细胞进行分离培养。细胞的种类按其来源、染色体特征及传代次数等可分为原代细胞、二倍体细胞及传代细胞三种类型。原代细胞培养根据需要,将活体器官如人胚肾、猴肾、鸡胚等无菌制成细胞悬液并培养成单层细胞后再分离培养病毒,但由于原代细胞只能传1~3代,器官来源、操作繁琐等问题使该方法应用受限,而二倍体细胞和传代细胞,由于可以长期传代、培养方便,故较为常用。常用于病毒分离鉴定的细胞种类见表8-1。
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