一、实验目的

    掌握以超声波提取、H2SO4净化、毛细管气相色谱法测定茶叶中有机氯农药残留量的原理与方法。

    二、实验原理

    以丙酮水溶液为提取剂，采用超声法提取茶叶中残留的有机氯农药，并经浓H2SO4净化处理后，用毛细管气相色谱法测定茶叶中有机氯农药残留。

    三、仪器与试材

    1．仪器与器材    

    气相色谱仪(带63Ni电子捕获检测器)、旋转蒸发装置、K-D瓶、超声波发生器、离心机等。

    2．试剂

    除特别说明，实验中所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或去离子水。

    (1)常规试剂：丙酮、正己烷、CH₂Cl₂、浓H₂SO₄、无水Na₂SO₄。

    (2)农药标准品：六六六(α—BHC、β—BHc、γ—BHC和δ一BHC)，DDT(p，p’—DDE、o，p’一DDT、p，p’一DDD和p，p’一DDT)，纯度均大于99％。

    (3)农药标准储备液(100μg／mL)：精密称取α—BHC、β—BHc、γ—BHC和δ一BHC、p，p’—DDE、o，p’一DDT、p，p’一DDD和p，p’—DDT各10mg，以正己烷溶解后定容至100mL。

    (4)农药混合标准使用液(1μg／mL)：吸取1mL各种标准储备液加入100mL容量瓶中，用正己烷定容。

    3．实验材料

    2～3种绿茶、红茶、花茶，各550g。

    四、实验步骤

    1．样品处理

    (1)将茶叶于60℃干燥4h，粉碎，过100目筛。

    (2)精密称取2．0g粉碎样品，置于100mL具塞锥形瓶中，加入20mL水浸泡过夜。

    (3)加40mL丙酮，超声处理30min，再加6g NaCl和30mLCH₂Cl₂后，再超声处理15min。

    (4)静置分层后，将有机相移入装有适量无水Na₂SO₄的100mL具塞锥形瓶中，脱水4h。

    (5)取35mL有机相置于旋转蒸发瓶中，于40℃水浴中减压浓缩至近干。

    (6)用适量正己烷多次溶解浓缩物并转移至10mL具塞刻度离心管中，定容至5mL。

    (7)小心加入1mL浓H₂SO₄，振摇1min，以3000r／min离心10min。

    (8)取2．0mL上清液至K—D瓶中，于40℃浓缩并定容至1.0mL。

    2．标准曲线的绘制  

    (1)取农药混合标准使用液0、0.1mL、0.2mI．、0.4mL、0.8mL、1.0mL，用正己烷定容至100mL，浓度分别为0、1.0ng／mL、2.0ng／mL、4.0ng／mL、8.0ng／mL、10.0ng／mL。上样至气相色谱仪，测定各浓度标准液的峰高，以浓度为横坐标，峰高为纵坐标，绘制标准曲线。

    (2)参考色谱条件：石英毛细管色谱柱(30m×0.25mm，0.52μm)；色谱柱升温程序为初始温度120℃，以10℃／min的速度升至220℃并保持1min，以8℃／min升至250℃并保持2min；进样口温度为230℃；检测器温度为：300℃；高纯氮气作载气，流速为1mL／min；进样方式为分流(分流比1：5)；进样量为1μL。

    3．样品测定

    (1)在上述条件下，将样品提取液导入气相色谱仪中，测定各成分的保留时间和峰高。

    (2)与标准品比较，进行定性和定量分析，从标准曲线上查找样品提取液中各成分的浓度。

    4．计算

    按下式计算样品中各种六六六和DDT异构体的含量。

    x=cV/m

    式中，x为样品中各种六六六和DDT异构体的含量，μg／kg；c为样品处理液中各种六六六和DDT异构体的浓度，ng／mL；V为样液的定容体积，mL；m为样品的质量，g。

    五、注意事项

    1．实验步骤中的色谱条件仅供参考，具体的分析条件应该根据所用气相色谱仪的型号，参考说明书中的条件进行。

    2．样品制备时最终浓度要适当。如果样品的浓度太高或者太低，应采用适当的稀释或者浓缩手段，以使测定时的浓度在标准曲线范围内。

    六、思考题

    1．简述超声波提取法分离提取样品中有机氯农药残留的原理。

    2．简述GC中电子捕获检测器的工作原理。

    3．叙述你在实验中使用的气相色谱仪的型号、各部件的名称和功能。

    4．比较TLC、气相色谱法和毛细管气相色谱法测定农产品(食品)中有机氯农药残留的优缺点。