一、实验目的

    掌握采用气相色谱法分析家畜肉中甲胺磷、敌敌畏、乙酰甲胺磷、久效磷、乐果、乙拌磷、甲基对硫磷、杀螟硫磷、甲基嘧啶磷、马拉硫磷、倍硫磷、对硫磷、乙硫磷共13种常用有机磷农药残留的样品提取、净化和测定方法。

    二、实验原理

    试样经提取、净化、浓缩、定容后，用毛细管柱气相色谱分离，火焰光度检测器检测，以保留时间定性，外标法定量。

    三、仪器与试材

    1．仪器与器材

    气相色谱仪(带火焰光度检测器、毛细管色谱柱)、组织捣碎机、振动器、旋转蒸发仪、玻

璃色谱柱等。

    2．试剂

    除特别说明外，实验中所用试剂均为分析纯，水为去离子水或蒸馏水。

    (1)常规试剂与溶液：丙酮(重蒸)、CH2Cl2(重蒸)、乙酸乙酯(重蒸)、环己烷(重蒸)、NaCl、无水Na2SO4f、Bio—Beads S-X3凝胶(200～400目)、乙酸乙酯-环己烷混合液(1+1，体积比)。

    (2)农药标准品：甲胺磷、杀螟硫磷、敌敌畏、甲基嘧啶磷、乙酰甲胺磷、马拉硫磷、久效磷、倍硫磷、乐果、对硫磷、乙拌磷、乙硫磷、甲基对硫磷。

    (3)有机磷农药标准储备液(400ug／mL)：称取各有机磷农药标准品0．0100g，分别置于

25mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并定容。

    (4)混合有机磷农药标准使用液：测定前，取不同体积的各有机磷农药储备液于lOmL容量瓶中，用氮气吹尽溶剂后，以乙酸乙酯溶解并定容，使混合标准使用液中各有机磷农药的浓度(μg／mL)分别为甲胺磷16、敌敌畏80、乙酰甲胺磷24、久效磷80、乐果16、乙拌磷24、甲基对硫磷16、杀螟硫磷16、甲基嘧啶磷16、马拉硫磷16、倍硫磷24、对硫磷16、乙硫磷8。

    3．实验材料

    1～2种新鲜猪肉、牛肉和兔肉，各250g。

    四、实验步骤

    1．样品提取

    (1)分别取150g样品去筋后，切成大小1cm。左右的小块，以组织捣碎机制成肉糜。同时测定水分含量。

    (2)称取样品糜20．00g于250mL具塞锥形瓶中，加入与样品含水量之和为20g的水和40mL丙酮，振摇30min，加6g NaCl，充分摇匀后，再加30mL CH2Cl2，振摇30min，静置10min。

    (3)取35mL上清液，经无水Na2SO4滤于旋转蒸发瓶中，于45C水浴中浓缩至约lmL后，加2mL乙酸乙酯一环己烷混合液萃取后再浓缩，如此重复3次，最后浓缩至约lmL。

    2．样品净化

    (1)色谱柱的准备：取长30cm、内径2.5cm的具活塞玻璃色谱柱，垂直固定，蛀底垫少许玻璃棉。将以乙酸乙酯环己烷混合液浸泡的Bio-Beads S-X3凝胶湿法装入柱中，控制装填量至柱床高约26cm。注意确保凝胶床始终保持在溶剂中。

    (2)将样品浓缩液经凝胶柱，以乙酸乙酯一环己烷混合液洗脱，收集35～70mL流分，于45℃水浴中旋转蒸发浓缩至约1mL。

    (3)再将浓缩液上凝胶柱，以乙酸乙酯一环己烷混合液洗脱，收集35～70mL流分，旋转蒸发浓缩至近干，以氮气吹至约1mL，以乙酸乙酯定容至lmL。

    3．测定

    (1)分别取1μL混合标准使用液与样品净化液注入色谱仪中，以保留时间定性，比较样品和标准品的峰高定量。

    (2)参考色谱条件：色谱柱为涂以SE-54 0.25“m、30m×0.32mm(内径)的石英弹性毛细管柱；进样口温度为270℃；检测器为火焰光度检测器；气体流速，氮气(载气)为1mL／min，

尾吹气为50mL／rain，氢气为50mL／min，空气为500mL／min；色谱柱升温程序为60℃(恒温)─40℃／min─→110℃ ─5℃／min─→235℃─40℃／min─→265℃。

    4．计算

    样品中有机磷农药残留的含量按下式计算：

    xi=miV2/mV1

    式中，xi为样品中i组分农药残留的含量，mg/kg；mi为样品提取液中i农药残留的质量，ng；m为样品的质量，g；V1为样液的进样体积，μL；V2为试样的最后定容体积，mL。

    五、注意事项

    1．实验步骤中的色谱条件仅作参考，在具体的实验过程中应根据仪器型号和实验条件进行调整。

    2．在本实验条件下，13种农药残留的出峰顺序依次是甲胺磷、敌敌畏、乙酰甲胺磷、久效磷、乐果、乙拌磷、甲基对硫磷、杀螟硫磷、甲基嘧啶磷、马拉硫磷、倍硫磷、对硫磷和乙硫磷。它们的检出限(扯g／kg)分别是5.7、3.5、10.0、12.0、2.6、1.2、2.6、2.9、2.5、2.8、2.1、2.6、1.7。

    六、思考题

    1．简述样品净化的重要性以及净化过程中各种溶剂的作用。

    2．在配制混合有机磷农药标准使用液时，为什么各种标准品的浓度应不同?