一、实验目的

    掌握水果中敌敌畏、速灭磷、久效磷、甲拌磷、巴胺磷、二嗪农、乙嘧硫磷、甲基嘧啶硫磷、甲基对硫磷、稻瘟净、水胺硫磷、氧化喹硫磷、稻丰散、甲喹硫磷、克线磷、乙硫磷等20种常见有机磷农药残留的气相色谱测定原理与方法。

    二、实验原理

    水果中残留的有机磷农药经有机溶剂提取、净化、浓缩后，注入气相色谱仪，汽化后在载气携带下于色谱柱中分离，当有机磷农药残留在火焰光度检测器的富氢焰上燃烧时，以氢氧磷(HPO)碎片的形式放射出波长为526nm的特征光。这种光通过检测器的单色器(滤光片)将非特征光谱滤除后，由光电倍增管接收，转换成电信号，信号强度(峰高或峰而积)与农药残留的含量成正比。通过与标准品的峰面积或峰高比较，可以对样品中各有机磷农药残留实现定量分析。

    三、仪器与试材

    1．仪器与器材

    气相色谱仪(带火焰光度检测器)、组织捣碎机、旋转蒸发仪等。

    2．试剂    

    除特别说明外，实验中所用试剂均为分析纯，水为去离子水或蒸馏水。

    (1)常规试剂：丙酮、CH2Cl2、NaCl、无水Na2SO4、助滤剂celite 545。

    (2)有机磷农药标准品：敌敌畏(纯度≥99％)、速灭磷(顺式，纯度≥60％；反式，纯度≥40％)、久效磷(纯度≥99％)、甲拌磷(纯度≥98％)、巴胺磷(纯度≥99％)、二嗪农(纯度≥98％)、乙嘧硫磷(纯度≥97％)、甲基嘧啶硫磷(纯度≥99％)、甲基对硫磷(纯度≥99％)、稻瘟净(纯度≥99％)、水胺硫磷(纯度≥99％)、氧化喹硫磷(纯度≥99％)、稻丰散(纯度≥99．6％)、甲喹硫磷(纯度≥99．6％)、克线磷(纯度≥99．9％)、乙硫磷(纯度≥95％)，共16种。

    (3)有机磷农药标准储备液：分别称取各标准品，以CH2Cl2为溶剂分别配制成1.0mg／mL的标准储备液，储于4℃。

    (4)混合有机磷农药标准使用液：根据各农药品种的仪器响应情况，吸取不同量的标准储备液，用CH2Cl2稀释成混合标准使用液。

    3．实验材料

    1～2种苹果、葡萄、梨，各250g。

    四、实验步骤    

    1．样品提取

    (1)将样品擦净，去除不可食部分，切成1 cm3大小的小块后，取50.00g，置于300mL。烧杯中，加入50mL水和100mL丙酮，置于组织捣碎机中，捣碎成匀浆。    

    (2)经铺有两层滤纸和约10g助滤剂celite 545的布氏漏斗减压抽滤，取滤液100mL移至

500mL分液漏斗中。

    2．样品净化

    (1)向滤液中加入15g左右NaCl，使溶液中NaCl处于饱和状态，剧烈振摇2～3min，静置10min，使丙酮从水相中盐析出来。

    (2)水相以50mL CH2Cl2振摇2min，再静置分层。将丙酮与CH2Cl2提取液合并，经装有30g无水Na2SO4的玻璃漏斗滤入250mI．圆底烧瓶中，再以约40mLCH2Cl2分数次洗涤容器和无水Na2SO4。

    (3)洗涤液合并入烧瓶中，于45℃旋转蒸发浓缩至约2mL，浓缩液转移至25mL容量瓶中，加CH2Cl2定容至刻度。

    3．测定

    (1)吸取2μL混合标准液及样品净化液分别注入色谱仪中，以保留时间定性，以试样的峰高或峰面积与标准比较定量。

    (2)参考色谱条件：色谱柱为玻璃柱[2．6m×3mm(内径)]；气体流速，氮气为50mL／min，氢气为100mL／min，空气为50mL／min(氮气、氢气和空气之比可按仪器型号不同进行调整)；柱温为240℃；汽化室温度为260℃；检测器温度为270℃。

    4．计算

样品中有机磷农药残留的含量按下式计算：

xi=AiV1V3msi / AsiV2V4m

    式中，xi为i组分有机磷农药的含量，mg／kg；Ai为试样中i组分的峰面积；Asi为混合标准液中i组分的峰面积；V1为样品提取液的总体积，mL；V2为净化用提取液的总体积，mE；V3为浓缩后的定容体积，mL；V4为进样体积，μL；msi为注入色谱仪中的i标准组分的质量，ng；m为样品的质量，g。

    五、注意事项

    1．实验步骤中的色谱条件仅作参考，实验时应根据仪器种类与型号以及实验条件进行预备实验，以确定最佳色谱条件。

    2．本法采用毒性较小且价格较为便宜的CH2Cl2作为提取试剂，国际上多用乙腈作为有机磷农药残留的提取试剂及净化试剂，但其毒性较大。

    3．在本实验条件下，16种农药残留的出峰顺序与检测限。

    六、思考题

    1．简述电子捕获检测器及火焰光度检测器的工作原理及适用范围。

    2．如何检验和提高实验方法的准确度?

    3．说明样品净化过程中加入NaCl的作用。