一、标本的采集、送检与保存

1.标本的种类 病毒性疾病通常采集鼻咽分泌物、痰液、粪便、脑脊液、疱疹内容物、血液、活检组织或尸检组织等标本。供分离病毒、检出核酸及抗原的标本由感染部位采集，如呼吸道感染采取鼻咽分泌物、洗漱液或痰液，肠道感染采集粪便，脑内感染采集脑脊液，水疱性疾病采集水疱皮和水疱液，有病毒血症时采集血液，活检组织应采集有病变的部位，若是尸体剖检后采集样品，一般是一采集有病理变化的器官或组织。不同的病毒疾病采集的标本各有不同，标本采集是否正确对于检验结果非常重要。

2．采样时间 对于病毒的分离培养应尽早采集标本，最理想的时期是在机体尚未产生抗体之前的急性期，此时较易检出病毒，越迟阳性率越低；特异性抗体检测需要采集急性期与恢复期双份血清，第一份血清尽可能在发病后立即采集，第二份在发病后2～3周采集。

3．标本的保存与送检 病毒离开活体组织后在室温下极易死亡，故采集的标本应尽快送检。若离实验室较远，应将标本加入保护剂（如Hank's液、牛血清白蛋白、50％缓冲甘油等）后放入装有冰块或干冰的容器内送检，以防病毒失活。实验室收到标本后应立即处理，反复冻融标本会降低病毒的分离率。如果标本在24 h以内接种，一般保存在4℃，如果需要耽搁较长时间，应将初步处理的标本放于-20℃或-70℃冰箱储藏为好。当标本接种细胞或组织时，应预留部分标本，以备再次接种或进一步检查用。

二、标本的处理

病毒含量较高的样品浸出液或体液，可不经过病毒分离直接用于诊断鉴定，对干病毒含量较少的标本，则需通过病毒的分离增殖来提高检出率。无菌的体液（腹水、骨髓液、脱纤血液、水疱液等）可不做处理，直接接种培养的组织细胞、鸡胚或实验动物，用于分离病毒。污染标本进行病毒分离前，首先要进行适当处理，然后才能接种。检测抗体的血清标本试验前应在56℃处理30 min以除去非特异性物质及补体。

1．组织器官标本的处理 以无菌操作取一小块标本，充分剪碎，置于乳钵中加玻璃砂研磨或用组织研磨器制成匀浆，随后加入1～2 ml Hank's液制成组织悬液，再次加入1～2 mL继续研磨，逐渐制成10％～20％的悬液；最后加入复合抗生素，以8000 r/min离心15min，取上清液用于病毒分离。

2．粪便标本的处理 取4～5 g粪便用Hank's液制成20％的悬液，在密闭的容器中强烈振荡30 min，以6000 r/min低温离心 30 min，取上清液再次重复离心，用450 nm的微孔滤膜过滤，加2倍浓度的复合抗生素，然后直接用于病毒分离或进行必要的浓缩后再进行病毒分离。

3．标本的特殊除菌处理 标本经过上述处理一般即可用于病毒分离，如有些标本用一般方法难以除去污染时，则应配合以下方法进行处理。

(1)过滤除菌：可用陶瓷滤器、石棉滤器或200 nm孔径的混合纤维素醋微孔滤膜等除菌。

(2)离心除菌：用低温高速离心机以18000 r/min离心20 min，可沉淀除去细菌，而病毒保持在上清液中，必要时转移离心管重复离心一次。

(3)乙醚除菌：对乙醚有抵抗力的病毒（如肠道病毒、鼻病毒、呼肠孤病毒、腺病毒、痘病毒、小RNA病毒等），可用冷乙醚等量加入样品悬液中充分振荡，置于4℃过夜，取下层水相分离病毒。

(4)普鲁黄（prof lavin）除菌：普鲁黄对肠道病毒和鼻病毒影响很小或没有影响，常用做粪或喉头样品中细菌的光动力灭活剂，将样品用0.0001 mol/L pH9.0的普鲁黄于37℃作用60 min，随后用离子交换树脂除去染料，将样品暴露于白光下，可使被光致敏的细菌或霉菌灭活。

4．标本中脂类物质和非病毒蛋白的去除 有些标本（如组织标本）脂类和非病毒蛋白含量很高，必要时在浓缩病毒样品之前可用有机溶剂（如正丁醇、三氯乙烯等）抽提，方法是将预冷的有机溶剂等量加入、样品中，强烈振荡后，1000 r/min离心5 min，脂类和非病毒蛋白保留在有机相，病毒则保留在水相。应当注意的是，对有机溶剂有抗性的病毒才能这样处理。