HPLC的类型按组分在两相间分离机理的不同主要分为液-固吸附色谱法、液-液分配色谱法、化学键合相色谱法、离子交换色谱法和凝胶色谱法等。

1.液-固吸附色谱法

液-固吸附色谱法(LSC)是以固体吸附剂为固定相，吸附剂表面的活性中心有吸附能力，试样分子被流动相带入柱内时，它将与流动相溶剂分子在吸附剂表面发生竞争性吸附。

目前经常使用的吸附剂有硅胶、氧化铝、分子筛（极性）和活性炭（非极性）等，以硅胶最为常用。

液-固吸附色谱法的流动相可以是各种不同极性的一元或多元溶剂。其分离原理是组分在两相间经过反复多次的吸附与解吸附分配平衡。

液-固吸附色谱法选择流动相的原则是：极性大的样品需用极性强的洗脱剂，极性弱的样品宜用极性较弱的洗脱剂。
液-固吸附色谱法选择性好，最大允许进样量较大，在分离几何异构体、族分离和制备色谱方面具有独特的意义。液-固色谱还可用于分离偶氮染料、维生素、甾族化合物、多核苷芳烃、脂肪、油类、极性较小的植物色素等。

2.液-液分配色谱法

液-液分配色谱法（LLC是根据物质在两种互不相溶（或部分互溶）的液体中溶解度的不同而实现分离的方法。通过在担体（载体）上涂渍一薄层固定液制备固定相，与流动相一起构成液-液两相，根据各组分在两相间分配系数的不同，经反复多次分配平衡而实现分离。

根据固定相和流动相之间相对极性的大小，可将分配色谱法分为两类。流动相极性小而固定相极性大的称为正相分配色谱法，常用于分离强极性化合物；流动相极性大而固定相极性小的称为反相分配色谱法，适于分离弱极性的化合物。

分配色谱法的固定相由载体和固定液组成。载体的材料可以是惰性的玻璃微球，也可以是吸附剂。常用的固定液只有几种极性不同的物质，如β,β'-氧二丙腈、聚乙二醇、聚酰胺、正十八烷和异三十烷等。

分配色谱法中所用流动相的极性必须与固定相显著不同，以避免固定相溶解于流动相而流失。一般原则是：若用极性较强的或亲水性物质为固定相，应以极性较弱的或亲脂性溶剂为流动相；若用非极性或亲脂性物质为固定相，则应以极性较大的或亲水性溶剂为流动相。选择流动相一般根据实验来选择，正相色谱法常用低极性溶剂，如烃类，加入适量极性溶剂如氯仿、醇类，以调节洗脱强度。反相色谱法的流动相多以水或无机盐缓冲液为主体，加入甲醇、乙腈等调节极性。梯度洗脱时，正相色谱法通常逐渐增大洗脱剂中极性溶剂的比例，而反相色谱法则与之相反，逐渐增大甲醇和乙腈的配比。正相色谱法与反相色谱法的比较见表7-1。

表7-1正相色谱法与反相色谱法的比较

液-液分配色谱法最适合同系物组分的分离。例如，它能分离水解蛋白质所生成的各种氨基酸，分离脂肪酸同系物等。由于涂敷在载体上的固定液易流失，重现性差，并且不适于梯度洗脱和采用高速流动相，所以在此基础上发展了一种新型固定相—化学键合固定相。

3.化学键合相色谱法

化学键合即用化学反应的方法通过化学键将固定液结合在载体表面。采用化学键合相的液相色谱法称为化学键合相色谱法，简称键合相色谱。键合固定相非常稳定，在使用中不易流失，适于梯度洗脱。由于键合到载体表面的官能团可以是各种极性的，因此它适用于各种样品的分离测定。用来制备键合固定相的载体，几乎都用硅胶。通常反应发生在硅胶表面的硅醇基（≡Si-OH）上，形成硅氧碳键型（≡Si-O-C)、硅氧硅碳型（≡Si-O-Si-C )、硅碳型（≡Si-C)和硅氮型(≡Si-N）四种类型，其中以硅烷化键合反应（硅氧硅碳型）最为常用，如十八烷基键合硅胶柱（简称碳十八柱，ODS柱），它是高效液相色谱法较为理想的固定相。

化学键合相具有以下特点：

1)固定相不易流失，柱的稳定性好，寿命较长；

2)能耐受各种溶剂，可用于梯度洗脱；

3）表面较为均一，没有液坑，传质快，柱效高；

4）能键合不同基团以改变其选择性，如键合氰基、氨基等极性基团用于正相色谱法，键合离子交换基团用于离子色谱法，键合C₂、C₄、C₆、C₈,C₁₆、C₁₈、C₂₂烷基和苯基等非极性基团用于反相色谱法等。

4.离子交换色谱法

离子交换色谱法的固定相是离子交换树脂，流动相是无机酸或无机碱的水溶液，它是利用待测样品中各组分离子与离子交换树脂的亲和力不同而进行分离的。一般可应用于离子化合物、有机酸和有机碱等能电离的化合物、能与离子基团相互作用的化合物（如鳌合物或配位体）的分离。离子交换树脂的交换机理如下：

式中，X⁺、X^-分别为待分离的组分离子；Y⁺、Y^-为流动相离子；R⁺、R^-为离子交换树脂上带电离子部分。

组分离子与流动相离子争夺离子交换树脂上的离子。组分离子对树脂的亲和力越大即交换能力越大，越易交换到树脂上，保留时间就越长；反之，亲和力越小的组分离子，保留时间就越短。

离子交换中所用固定相通常是由苯乙烯和二乙烯基苯共聚而制备的树脂。合成中所使用的二乙烯基苯的量控制了树脂的交联度。

通常可在交联后通过化学反应将离子基团引入树脂，根据官能团的酸度和碱度，可将阳、阴离子交换树脂划分为强和弱的阳、阴离子交换树脂。强阳离子交换树脂常含有磺酸基（一SO₃H）官能团，而弱阳离子交换树脂则含有羧基(一C00H）官能团。强阴离子交换树脂含有烷基胺官能团，而弱阴离子交换树脂常含有弱碱性的一NH₂官能团。

离子交换树脂一般采用水的缓冲液作流动相。水是一种理想的溶剂，以水溶液为流动相时可通过改变流动相的pH、缓冲液的类型（提供用以平衡的反离子）、离子强度以及加入少量有机溶剂、配位剂等方式来改变交换剂的选择性，使待测样品达到良好的分离。

离子交换色谱法常用于碱金属、碱土金属、稀土金属等金属离子混合物的分离，性质十分相近的镧系和锕系元素的分离，食品中添加剂及污染物的分析，生物大分子的分离，如氨基酸、蛋白质、糖类、核糖核酸、药物等样品的分离。

5.凝胶色谱法

凝胶是一种经过交联的、具有立体网状结构和不同孔径的多聚体的通称。如葡萄糖凝胶、琼脂糖等软质凝胶，多孔硅胶、聚苯乙烯凝胶等硬质凝胶及具有较好特性的可控孔径玻璃珠等。

凝胶色谱法的固定相为多孔性凝胶类物质，流动相为水溶液或有机溶剂，它是根据不同组分分子体积的大小进行分离的。当试样随流动相进入分离柱时，小体积的分子可以扩散、渗透到孔穴内部，最后从柱中流出；大体积分子则被排阻在孔穴之外，不能扩散到孔的内部，最先从柱中流出；中等体积分子介于两者之间流出。所以这种方法又称为尺寸排阻色谱法、空间排阻色谱法或筛析色谱法。