茶叶中所含的多酚类物质是一种以儿茶素为主体的酚类化合物，是茶多酚的主体成分，儿茶素约占茶多酚总量的65%～80%,主要包括没食子酸（GA）、表没食子儿茶素（EGC）、表儿茶素（EC）、儿茶素（+C）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、没食子基儿茶素没食子酸酯（GCG）和表儿茶素没食子酸酯（ECG）等。开发和利用天然抗氧化剂已经成为当今世界食品药品科技发展的方向。儿茶素作为一种重要的抗氧化剂，主要用于抗癌、抗肿瘤、清除人体自由基，还可用于防止龋齿、抑菌等。研究发现EGCG在体内外对许多肿瘤细胞增殖具有抑制作用［1］。目前测定儿茶素组分的首选方法为高效液相色谱（HPLC）法［2–6］。我国现行检测茶叶中儿茶素组分及咖啡碱（CAF）的最新国家标准GB／T8313–2008［7］也是HPLC法，该法采用甲醇多次提取法对样品进行前处理，操作繁琐，流动相组成复杂，样品分析时间过长，所需试剂和仪器多且昂贵。

笔者采用水提法进行样品浸提，并与GB／T8313–2008进行比较，结果表明所建立的方法操作简单，成本低，效率高，使用范围广，能同时测定7种儿茶素组分及咖啡碱，效果较好。

1实验部分

1.1主要仪器与试剂

高效液相色谱仪：Agilent1260型，美国安捷伦科技有限公司；电子天平：BSA224S–CW型，北京赛多利斯科学仪器有限公司；恒温水浴锅：HH·SY21–Ni8型，北京长源实验设备厂；抽滤装置：2XZ–0.5型，浙江黄岩黎明实业公司；超纯水制备器：TST–RO–20型，石家庄泰斯特仪器设备有限公司；数控超声清洗器：KQ5200DE型，昆山市超声仪器有限公司；离心机：TGL–20bR型，上海安亭科学仪器厂；快速混匀器：SK–1型，金坛市杰瑞尔电器有限公司；甲醇、N，N-二甲基甲酰胺、乙睛：均为色谱纯；乙酸、乙二胺四乙酸（EDTA）、抗坏血酸：均为分析纯；GA，CAF，EGC，+C，EC，EGCG，GCG，ECG混合对照品：国家植物功能成分利用工程技术研究中心／教育部茶学重点实验室；各儿茶素组分及咖啡碱对照品：纯度均不小于98%，北京世纪奥科生物技术有限公司；实验用水为纯净水。

1.2色谱条件

色谱柱：C18（250mm×4.6mm，5μm）；柱温：35℃；紫外检测器波长：278nm；流动相：A相（超纯水），B相（N,N-二甲基甲酰胺︰甲醇︰冰乙酸=40︰2︰1.5）；流动相流速：1.0mL／min；进样量：5μL。

1.3对照品溶液的配制

精密称取GA，CAF，EGC，+C，EC，EGCG，GCG，ECG混合对照品适量，加纯净水配制成分别含9.71μg／mLGA，101.97μg／mLCAF，81.09μg／mLEGC，7.35μg／mL+C，64.23μg／mLEC，400.16μg／mLEGCG，7.27μg／mLGCG，91.83μg／mLECG的混合对照品溶液。

1.4供试品溶液的制备

取部分水提取液（GB／T8305–1987）［8］过0.45μm水系微孔滤膜。在1.2色谱条件下进行测定。采用保留时间识别各目标组分，以外标法确定相应组分的浓度。

2结果与分析

2.1色谱图

在1.2色谱条件下取供试品溶液5μL进样，记录色谱图。GB／T8305–1987水提取法色谱图如图1所示。

按照GB／T813–2008甲醇提取法进行样品处理后进样分析（不含GCG），供试品的色谱图如图2所示。图2表明，甲醇提取法样品中的EGCG与EC不能有效分离。

2.2线性回归方程和相关系数

分别精密吸取混合对照品溶液2.5，5.0，7.5，10，12.5和15μL［9］，按1.2色谱条件进样测定，同一体积的样品平行分析3次，取其平均值。以峰面积（Y）为纵坐标、进样量（X，μL）为横坐标作图，得到各组分的线性回归方程如表1。由表1可知，当对照品溶液进样量在2.5～15μL，GA，CAF，EGC，DL-C+C，EC，EGCG，GCG和ECG8种组分的进样量分别在0.0243～0.1456，0.2549～1.5296，0.2027～1.2164，0.0182～0.1102，0.1606～0.9634，1.0004～6.0024，0.0182～0.1090，0.2296～1.3774μg范围内与色谱峰面积的线性关系良好，相关系数r为0.9910～0.9999。

2.3加标回收率及精密度

吸取9份已知含量的绿茶提取液各1mL，分为3组，每组3份。分别加入混合对照品溶液0.5，1.0，1.5mL，按实验方法进行测定，计算GA，CAF，ECG，+C，EC，EGCG，GCG和ECG的含量，计算各组分的回收率及精密度，结果见表2。由表2可知，所有组分的回收率在98.60%～100.17%之间，测定结果的相对标准偏差（RSD)均小于0.48%，说明该方法重现性良好，检测结果可靠，满足检测要求。

2.4样品测定

取同一批号样品6份，分别在1.2色谱条件下及按照国标方法进行6次平行测定，取平均值作为测定结果，见表3。由表3可知，与现行标准方法相比，水提取法测定结果的相对偏差在0.47%～5.55%之间。另外，水提法有部分脂溶性儿茶素不能完全溶出，而GB／T8313–2008甲醇提取法EGC，EGCG和ECG的含量相对较高；GA和+C测定结果差别不大，在误差范围内；用70%的甲醇溶液提取，虽然提取完全，但提取液中含有大量的叶绿素，进行液相色谱检测时泵压明显增大，对色谱柱污染严重，使柱寿命缩短；甲醇提取法样品中的EGCG和EC不能分离，对色谱柱的要求较高；甲醇提取法操作也较繁琐，有机溶剂用量较大，不利于环保和节约成本。用水提取样品不仅能达到较好的提取效果，且可以直接利用水浸出物的提取液，无需重新浸提，步骤简便，成本较低。

3结语

用水浸出方式提取绿茶样品，HPLC法测定茶叶中的儿茶素和咖啡碱，操作简便，结果准确。