紫外分光光度定量分析和可见分光光度定量分析的定量依据和定量方法都是相同的，但紫外吸收光谱法进行定量分析一般不需要显色剂，因而不受显色剂浓度、显色时间等因素的影响，它具有快速、简便、灵敏度高、重现性好等优点，广泛应用于微量和痕量分析中，也可用于常量组分的测定。

测定条件的选择主要是选择测定波长和溶剂。

1.测定波长的选择

对已知具有紫外吸收的有机化合物，可用紫外分光光度法，依据比尔定律测定其含量。在进行定量分析前，应首先绘制紫外吸收光谱图来确定其最大吸收波长λ_max，并测其摩尔吸光系数ε，通常选择λ_max作为测定波长。一般不选择小于230nm的波长作为测定波长，因为此时吸收池的散射和氢灯的能量会影响测定结果。

当被测物为单一物质时，可用一般分光光度法中采用的工作曲线法；或用与已知浓度标准溶液进行比较的单点校正法，即：

式中，c为浓度；A为吸光度；m样为样品质量。

若样品中含有两种或两种以上组分时，若其吸收光谱互不重叠，就表示在每个组分的最大吸收波长处各个组分互不干扰，此时可采用单组分测定的方法进行定量分析。

若在λ_max处共存的其它物质也有吸收，可以另外选择ε较大而共存物质没有吸收的波长作为测定波长。此时灵敏度会降低。

若样品中组分的吸收光谱互相重叠，则可利用下式：

A_总＝A_a+A_b+A_c+…+A_n

即任何混合物的吸光度为其各个组分吸光度的加和。若为含A、B两组分的样品，可用差减法，分别求出A、B各自的含量。对含有三个以上组分的样品，可利用在三个吸收波长下进行吸光度的测量，在获得每种组分在各个吸收波长的摩尔吸光系数之后，可用解三元联立方程的方法求出各个组分的含量。此外还可应用双波长分光光度法或使用化学计量学中的多元统计分析(如多元线性回归、岭回归、主成分回归、偏最小二乘法、因子分析、卡尔曼滤波法、改进矩阵法等)来进行多组分混合物的定量测定。

2.测定用有机溶剂的选择

在使用有机溶剂的测定中，应选择好制备样品时适用的有机溶剂。所选择的溶剂应在测定波长下无明显的吸收、对被测物和显色剂都有较好的溶解度，并不和被测物发生相互作用。应尽可能选择挥发性小、不易燃、无毒性及价廉的溶剂。
常用溶剂在不同光径吸收池中适用的波长范围下限，见表6-5。

表6-5常用溶剂及其适用波长范围下限

测定时，应事先按照国家标准GB 9721-2006“化学试剂分子吸收分光光度法通则(紫外和可见光部分)”的要求检验所选溶剂的空白值。表6-6列出了有机溶剂在规定波长下的吸光度。

表6.6紫外可见分光光度法对有机溶剂的吸光度要求

①检定的方法是用1 cm石英吸收池，以空气为参比，在规定波长下测定有机溶剂的吸光度。

相关链接：紫外分光光度计