实验方法

1主要仪器与试剂

液相色谱仪：HITACHIL–2000型、配L–2485荧光检测器、在线脱气机、柱温箱，上海天美科学仪器有限公司；

光化学衍生反应器：PriboFastKRC–25型，北京泰乐琪生物科技有限公司；

高速均质器：T8型，转速为5000～25000r／min，德国IKA公司；

甲醇：色谱纯；实验用水：屈臣氏蒸馏水；

PBS缓冲液：称取8.0g氯化钠、1.2g磷酸氢二钠、0.2g磷酸二氢钾、0.2g氯化钾，用990mL水溶解，用浓盐酸调至pH7.0，最后用水定容至1000mL；吐温20–PBS缓冲液：取1.0mL吐温20，加入PBS缓冲液定容至1000mL；黄曲霉毒素B1标准物质：100µg／mL(乙腈基质)，北京泰乐琪生物科技有限公司；

黄曲霉毒素B1免疫亲和层析柱：PribofastICA–010–3mL型，北京泰乐琪生物科技有限公司。

2液相色谱条件

色谱柱：LachromC₁₈色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇–水(体积比为45∶55)，

流量为0.8mL／min；柱温：25℃；激发波长：360nm；发射波长：420nm；进样体积：20µL。

3样品处理

如果是固体样品，称取(15.00±0.01)g粉碎的样品；如果是油脂则直接取样，无需处理。本次试验采用的是市售大豆植物油。

准确加入125.0mL提取液甲醇–水溶液(体积比为70∶30)及5.0g氯化钠，以均质器高速搅拌2～3min后以4000r／min离心5min(或用槽纹滤纸过滤)，取15mL滤液加入30mL水稀释，用玻璃纤维滤纸过滤，收集全部滤液。

4免疫亲和柱净化

准确移取15.0mL滤液注入免疫亲和柱，调节流速约1～2滴／s，待溶液完全流出后，分别用10.0mL的吐温–PBS缓冲液和纯水以约2～3滴／s流速清洗免疫亲和柱，弃去全部流出液。用甲醇以1～2滴／s流速慢慢洗脱免疫亲和柱中待测物质，收集全部洗脱液并定容至2.0mL，待测。

5实验步骤

5.1标准溶液的制备

准确移取0.5mL黄曲霉毒素B1标准物质，用流动相定容至100.0mL，配制成质量浓度为500ng／mL的标准储备液，再将其用流动相逐级稀释，配制成黄曲霉毒素B1质量浓度分别为1.0，2.0，5.0，10.0，20.0ng／mL的系列标准工作溶液。

5.2样品测定

于开机前10min打开光化学衍生反应器，色谱仪按1.2色谱条件稳定后，分别取处理后的样液和系列标准工作溶液各20μL进行测定，以色谱峰面积积分，绘制标准曲线。