色谱柱的准备

色谱柱的选择是色谱分离工作最为重要的一环，选择好适用的色谱柱可以使分离工作事半功倍。选择柱子时，除了考虑固定相的种类，还应考虑固定相的颗粒大小，以及柱子的长度和口径。

早期的色谱柱通常是使用者根据需要，选择固定相后自行制备。现在，除少数特殊色谱柱还需制备外，各种色谱柱均已商品化，使用者可根据分离的需要从仪器公司获得。有关详细内容还应参阅固定相选择的相关内容。

梯度洗脱技术

梯度洗脱技术可以改进复杂样品的分离，改善峰形，减少拖尾并缩短分析时间，而且还能降低最小检测量和提高分离精度。梯度洗脱对复杂混合物、特别是保留值相差较大的混合物的分离是极为重要的手段，因为这些样品的k’范围宽，不能用等度方法简单地处置。

有些样品用等度洗脱可能分离得也很好，但色谱柱中可能滞留有少量强保留组分，使柱子逐步失活，还可能干扰到下一个样品的分析。这种情况也可以采用梯度洗脱技术来解决。

值得注意的是，虽然梯度洗脱技术比等度洗脱复杂，实用方法的建立较困难，且梯度洗脱时基线常常飘移不定，但是随着仪器设备、材料的发展以及对这种技术更好的理解，上述问题基本上已被克服，因此，梯度洗脱技术已经成为液相色谱常用的重要技术之一。

衍生化技术

所谓衍生化，就是将用通常检测方法不能直接检测或检测灵敏度比较低的物质与某种试剂(即衍生化试剂)反应，使之生成易于检测的化合物。按衍生化的方法可以分为柱前衍生化和柱后衍生化。

柱前衍生化是指将被检测物转变成可检测的衍生物后，再通过色谱柱分离。这种衍生化可以是在线衍生化，即将被测物和衍生化试剂分别通过两个输液泵送到混合器里混合并使之立即反应完成。随之进入色谱柱；也可以先将被测物和衍生化试剂反应，再将衍生化产物作为样品进样；或者在流动相中加入衍生化试剂，进样后，让被测物与流动相直接发生衍生化反应。

柱后衍生化是指先将被测物分离，再将从色谱柱流出的溶液与反应试剂在线混合，生成可检测的衍生物，然后导人检测器。按生成衍生物的类型又可分为紫外一可见光衍生化、荧光衍生化、拉曼衍生化和电化学衍生化。

衍生化技术不仅使高效液相色谱分析体系复杂化，而且需要消耗时间，增加分析成本，有的衍生化反应还需要严格控制反应条件。因此，只有在找不到方便而灵敏的检测方法，或为了提高分离和检测的选择性时才考虑用衍生化技术。

样品的预处理技术

与气相色谱中的样品预处理一样，液相色谱样品预处理的目的是去除基体中干扰样品分析的杂质，提高被测定化合物检测的灵敏度和检测的准确度，改善定性定量分析的重复性。

实际分析过程中，在气相色谱中适用的样品预处理方法往往也适用于液相色谱中样品的预处理。用于液相色谱样品预处理的方法较多，如浓缩、稀释、超滤、微渗析等。