1．原理

土壤中磺胺类抗生素采用甲醇/EDTA-Mcllvaine缓冲液提取，由于提取液中含有较多腐殖质的杂质，采用LC-SAX和LC-18串联固相萃取小柱净化富集；用高效液相色谱仪，以乙腈和0.01 mol/L H₃PO₄作为流动相，于270 nm波长处对样品进行检测(李彦文等2008)。

2．仪器

高效液相色谱仪，配紫外检测器；固相萃取装置；LC-SAX固相萃取小柱(3 mL/500 mg) ; LC-18固相萃取小柱(3 ml,/500 mg)。

3．主要试剂

甲醇、乙腈均为色谱纯；实验用水均为高纯水；其余试剂为分析纯。

EDTA-Mcllvaine缓冲液配制：称取12.9 g柠檬酸，27.5 g Na₂HPO₄ , 37.2 g乙二胺四乙酸二钠，溶于水中并定容到1 L(pH=4.0)。

4．标准物质

磺胺嘧啶(sulfadiazine, SDZ)、磺胺吡啶(sulfapyridine, SPD),磺胺甲基嘧啶(sulfamerazine, SMR)、磺胺-5-甲氧嘧啶(sulfameter, SMT)、磺胺间二甲氧嘧啶(sulfadimethoxine, SDM)、磺胺甲恶唑(sulfamethoxazole, SMZ)，纯度＞98.0％。

标准品母液的配制：准确称取0.0100g抗生素标准品溶于乙腈并定容至100 mL，配制成浓度为100 mg/L的工作母液，避光冷藏保存。

工作溶液的配制：将标准品母液用流动相稀释，配制成浓度范围在0.01～1.0 mg/L的磺胺类抗生素混合标准系列溶液，现配现用。

5，分析步骤

将采集的土壤样品经四分法缩分，风干粉碎后过60目筛备用。准确称取2.0 g样品置于20 mL的玻璃离心管中，加入5 mL甲醇/EDTA-Mcllvaine缓冲液(1：1,V/V)混合液，将离心管放在高速涡漩混匀器上混匀2 min，然后把离心管置于超声波中超声10 min，在4 000 r/min转速下离心5 min并收集上清液。残渣再用上述方法反复提取2次，合并提取液，浓缩至5 mL，浓缩液通过LC-SAX与LC-18串联柱(串联柱先后用6 mL甲醇、6 mL水进行预处理)。待富集完成后，用6mL超纯水清洗串联柱，真空干燥10 min，拆下SAX小柱，用3 mL甲醇洗脱LC-18小柱，收集洗脱液并浓缩至近干，用V(甲醇)，V(水)＝60:40溶液定容至1 mL，待测。

6．液相色谱分析条件

色谱柱，ODS-C18(150 mm×4.6 mm)；柱温，30℃；检测波长，270nm；进样量，20 uL；流动相，V(乙腈)，V(0.01 mol/L H₃PO₄)=20:80。

六种抗生素在土壤中的检出限为0.24～3.3 ug/kg，土壤中的回收率72.6％～85.3％。

7．结果计算

样本中磺胺类抗生素的含量，按以下公式计算：

式中，X为样本中磺胺类抗生素含量, mg/kg；c为从标准曲线上得到的被测组分的溶液质量浓度，mg/L; V为样品提取时最后定容的体积，mL；m为试样质量数值，g；R为添加回收率，％。