聚丙烯酰胺凝胶电泳(f)olyacytamide-gel electrophoresis，PAGE)是以聚丙烯酰胺凝胶为支持介质的区带电泳。由于它的分子筛效应提高了电泳分辨率，不仅能分离含有各种大分子物质的混合物，而且还可研究生物大分子的电荷、分子量、等电点等特性。常规的PAGE：是在非解离的缓冲系统中分离蛋白质，属非解离电泳(或称非变性电泳)。在电泳过程中仍保持蛋白质的天然构象及生物活性，根据其电泳迁移率，可测得天然蛋白的分子量。

PAGE与琼脂糖凝胶电泳相比，在分离500bp的DNA时，相差一个bp单位的DNA即能被分开，而琼脂糖凝胶电泳需相差10个bp单位才能区分。此外PAGE载样量大，回收的DNA纯度高，但不足之处是PAGE的凝胶浓度在3％左右时，很难聚合生成半固体的凝胶，故不能用于2000bp以上大分子DNA的分离。

聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和交联剂亚甲基双丙烯酰胺在催化剂和增速剂催化下聚合而成，属不带电荷的非离子型多聚物，具有分子筛效应的三维网状结构，并可通过调整凝胶浓度制成不同孔径的凝胶，用于分离不同分子大小的物质。聚丙烯酰胺凝胶机械性能好，对热稳定，不溶于缓冲液，无色透明，在280nm波长处无紫外吸收，电泳时无电内渗和吸附作用，故成为目前最常用的凝胶电泳的支持介质。除常规PAGE外，相继建立了测定蛋白质(或肽、核酸)分子量的SDS—PAGE和等电聚焦PAGE。

USP、EP等药典附录中的平板电泳法主要收载PAGE和SDS—PAGF：凝胶电泳。

根据电泳时所用的缓冲液组成、pH值和凝胶浓度，PAGE可分为连续电泳和不连续电泳。

连续电泳(continuous electrophoresis)：是指所用的缓冲液组成、pH值和凝胶孔径均相同的电泳分离系统。一般只用于分离组分比较简单的样品，因没有浓缩效应，分辨率不如不连续电泳，但其制作较简单，只要凝胶和一种缓冲液即可进行电泳分离。

不连续电泳(discontinuous electrophoresis)：又称为圆盘电泳(disc electrophoresis),是指在电泳系统中使用了两种或两种以上不同缓冲液和不同的凝胶浓度，即缓冲液离子成分不同的不连续性，pH值不同的不连续性和孔径不同的不连续性。在电泳时，使样品(特别稀浓度样品)在浓缩胶和分离胶两种不连续的界面先浓缩成一窄的起始带，待进入分离胶时，再根据分子大小和电荷效应分离得到窄的分离区带，此法的分离效果好，分辨率高。

(1)仪器装置
通常由稳流电泳仪和圆盘电泳槽或平板电泳槽组成。其电泳室有上、下两槽，每个槽中都有固定的铂电极，铂电极经隔离电线接于电泳仪稳流档上。

(2)试剂

①溶液A 取三羟甲基氨基甲烷36.6g、四甲基乙二胺0.23ml，加1mol／L盐酸溶液48m1，再加水溶解并稀释至100ml，置棕色瓶内，在冰箱中保存。

②溶液B 取丙烯酰胺30.0g次甲基双丙烯酰胺0.74g，加水溶解并稀释至100m1，滤过，置棕色瓶内，在冰箱中保存。

③电极缓冲液(pH8．3) 取三羟甲基氨基甲烷6g、甘氨酸28．8g，加水溶解并稀释至1000ml，置冰箱中保存，用前稀释10倍。

④溴酚蓝指示液 取溴酚蓝0.1g，加0.05moL／L氢氧化钠溶液3.Oml与90％乙醇5ml,微热使溶解，加20％乙醇制成250m1。

⑤染色液 取0.25％(g／m1)考马斯亮蓝6250溶液2.5ml，加12.5％(g／m1)三氯醋酸溶液至10ml。

⑥稀染色液 取上述染色液2ml，加12.5％(g／m1)三氯醋酸溶液至10ml。

⑦脱色液 7％醋酸溶液。

(3)操作法

①制胶 取溶液A 2ml，溶液B 5．4ml，加脲2.9g使溶解，再加水4ml，混匀，抽气赶去溶液中气泡，加O.56％过硫酸铵溶液2m1，混匀制成胶液，立即用装有长针头的注射器或细滴管将胶液沿管壁加至底端有橡皮塞的小玻璃管(10cm×0.5cm)中，使胶层高度达6—7cm，然后徐徐滴加水少量，使覆盖胶面，管底气泡必须赶走，静置约30分钟，待出现明显界面时即聚合完毕，吸去水层。

②对照品溶液及供试品溶液的制备照各品种项下的规定。

③电泳 将已制好的凝胶玻璃管装入圆盘电泳槽内，每管加供试品或对照品溶液50-100m1,为防止扩散可加甘油或40％蔗糖溶液1～2滴及0.04％溴酚蓝指示液1滴，也可直接在上槽缓冲液中加0.04％溴酚蓝指示液数滴，玻璃管的上部用电极缓冲液充满，上端接负极，下端接正极。调节起始电流使每管为lmA，数分钟后，加大电流使每管为2-3mA，当溴酚蓝指示液移至距玻璃管底部lcm处，关闭电源。

④染色和脱色 电泳完毕，用装有长针头并吸满水的注射器，自胶管底部沿胶管壁将水压入，胶条即从管内滑出，将胶条浸入稀染色液过夜或用染色液浸泡10～30min,以水漂洗干净，再用脱色液脱色至无蛋白区带凝胶的底色透明为止。

⑤结果判断将胶条置灯下观察，根据供试品与对照品的色带位置和色泽深浅程度进行判断。

相对迁移率供试品和对照品的电泳区带有时可用相对迁移率(R'm)进行比较。

扫描 将清晰的胶条置双波长薄层扫描仪或凝胶电泳扫描仪中扫描并积分，由各组分的峰面积计算含量(％)。