(二)氢化物原子荧光光谱法

1．原理

试样经酸加热消化后，在6mol/L盐酸介质中，将试样中的六价硒还原成四价硒，用硼氢化钠或硼氢化钾作还原剂，将四价硒在盐酸介质中还原成硒化氢(H₂Se)，由载气(氢气)带入原子化器中进行原子化，在硒空心阴极灯照射下，基态硒原子被激发至高能态，在去活化回到基态时，发射出特征波长的荧光，其荧光强度与硒含量成正比。与标准系列比较定量。

2．试剂

除非另有规定，本方法所使用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的三级水。

(1)硝酸、高氯酸、盐酸、氢氧化钠等均为优级纯。

(2)混合酸将硝酸与高氯酸按9:1体积混合。

(3)硼氢化钠溶液(8g/L)称取8.0g硼氢化钠(NaBH₄)，溶于氢氧化钠溶液(5g/L)中，然后定容至1000mL ,混匀。

(4)铁氰化钾(100g/L)称取10.0g铁氰化钾[K₃Fe(CN₆)]，溶于100mL水中，混匀。

(5)硒标准储备液精确称取100.0mg硒(光谱纯)，溶于少量硝酸中，加2mL高氯酸，置沸水浴中加热3～4h，冷却后再加8.4mL盐酸，再置沸水浴中煮2min，准确稀释至1000mL，其盐酸浓度为0.1 mol/L，此储备液浓度为每毫升相当于100 ug硒。

(6)硒标准应用液取100ug/mL硒标准储备液1.0mL，定容至100mL，此应用液浓度为1ug/mL。

注：也可购买该元素有证国家标准溶液。

(7)盐酸(6mol/L)量取50mL盐酸(优级纯)缓慢加入40mL水中，冷却后定容至100mL,

(8)过氧化氢(30%)。

3．仪器设备

(1)原子荧光光谱仪，带硒空心阴极灯。

(2)电热板、粉碎机、烘箱。

(3)微波消解系统。

(4)天平感量为1 mg

4．检测步骤

(1)样品处理

①粮食：试样用水洗三次，于60℃烘干，粉碎，贮于塑料瓶内，备用。

②蔬菜及其他植物性食物：取可食部位用水洗净后用纱布吸去水滴，打成匀浆后备用。

③其他固体试样：粉碎，混匀，备用。

④液体试样：混匀，备用。

⑤试样消解

a．电热板加热消解：称取0.5～2g(精确至0.001g)试样，液体试样吸取1.00～10.00mL，置于消化瓶中，加10.0mL混合酸及几粒玻璃珠，盖上表面皿冷消化过夜。次日于电热板上加热，并及时补加硝酸。当溶液变为清亮无色并伴有白烟时，再继续加热至剩余体积2mL左右，切不可蒸干。冷却，再加5.0mL盐酸(6mol/L)，继续加热至溶液变为清亮无色并伴有白烟出现，将六价硒还原成四价硒。冷却，转移至50mL容量瓶中定容，混匀备用。同时做空白试验。

b．微波消解：称取0.5～2g(精确至0.001g)试样于消化管中，加10 mL硝酸、2 mL过氧化氢，振摇混合均匀，于微波消化仪中消化，其消化推荐条件如表2-6所示(可根据不同的仪器自行设定消解条件)：

表2-6微波消化推荐条件

冷却后转入三角瓶中，加几粒玻璃珠，在电热板上继续加热至近干，切不可蒸干。再加5.0mL盐酸(6mo1/L)，继续加热至溶液变为清亮无色并伴有白烟出现，将六价硒还原成四价硒。冷却，转移试样消化液于25 mL容量瓶中定容，混匀备用。同时做空白试验。

吸取10.0mL试样消化液于15 mL离心管中，加盐酸(优级纯)2.0mL，铁氰化钾溶液(100g/L) 1.0mL，混匀待测。

(2)标准曲线的配制分别取0.00、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50mL标准应用液于15mL离心管中用去离子水定容至1 0mL，再分别加盐酸(优级纯)2mL，铁氰化钾溶液(100g/L) 1.0mL,混匀，制成标准工作曲线。

(3)测定

①仪器参考条件：负高压：340V；灯电流：100mA ;原子化温度：800℃；炉高：8mm；载气流速：500mL/min ;屏蔽气流速：1000mL/min；测量方式：标准曲线法；读数方式：峰面积；延迟时间：1s；读数时间：15s；加液时间：8s；进样体积：2mL。

②测定：设定好仪器最佳条件，逐步将炉温升至所需温度后，稳定10～20min后开始测量。连续用标准系列的零管进样，待读数稳定之后，转入标准系列测量，绘制标准曲线。转入试样测量，分别测定试样空白和试样消化液，每次测不同的试样前都应清洗进样器。

5．结果计算

式中h—试样中硒的含量，mg/kg或mg/L;

P—试样消化液测定浓度，ng/mL;

P_o—试样空白消化液测定浓度，ng/mL ;

m—试样质量或体积，g或mL ;

V—试样消化液总体积，mL

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

文章来源：《食品质量与安全检测技术》

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