按照食品安全国家标准5004.28-2016规定，食品中苯甲酸、山梨酸有两种测定方法，方法一为液相色谱法，与食品中糖精钠同时测定。具体方法详见第四节食品中糖精钠的测定。这里介绍气相色谱法测定苯甲酸和山梨酸的方法。

(一)原理

试样经盐酸酸化后，用乙醚提取苯甲酸、山梨酸，用气相色谱-氢火焰离子化检测器分离测定，外标法定量。

(二)试剂和仪器

1.试剂

①乙醚、乙醇、正己烷、乙酸乙酯

②盐酸溶液(1+1)：取50mL盐酸，边搅拌边慢慢加入到50mL水中，混匀。

③氯化钠溶液(40g/L)：称取40g氯化钠，用适量水溶解，加盐酸溶液2mL，加水定容到1L。

④正己烷-乙酸乙酯混合溶液(1+1)：取100 mL止己烷和100 mL乙酸乙酯，混匀。

⑤无水硫酸钠：500℃烘8h，于干燥器中冷却至室温后备用。

⑥苯甲酸、山梨酸标准储备液(1000mg/L)：分别准确称取苯甲酸钠和山梨酸钾标准品(纯度≥99.0%)各0.1g(精确到0.0001g)，用甲醇溶解并分别定容至100mL。转移至密闭容器中，于-18℃贮存，保存期为6个月。

⑦苯甲酸、山梨酸标准中间液(200mg/L)：分别准确吸取苯甲酸、山梨酸标准储备液各10.0mL于50 mL容量瓶中，用乙酸乙酯定容。转移至密闭容器中，于-18℃贮存，保存期为3个月。

⑧苯甲酸、山梨酸混合标准系列工作溶液：分别准确吸取苯甲酸、山梨酸混合标准中间溶液0、0.05、0.25、0.50、1.00、2.50、5.00、10.0mL，用正己烷-乙酸乙酯混合溶剂(1+1)定容至10mL，配制成质量浓度分别为1、1.00、5.00、10.0、20.0、50.0、100、200mg/L的混合标准系列工作溶液。临用现配。

2. 仪器

①气相色谱仪：带有氢火焰离子化检测器。

②分析天平：感量为0.001g和0.0001g。

③涡旋振荡器、匀浆机、氮吹仪。

④离心机：转速＞8000r/min

(三)测定步骤

1. 试样制备

取多个预包装的样品，均匀样品直接混合，非均匀样品用组织匀浆机充分搅拌均匀，取其中的200g装入洁净的玻璃容器中，水溶液于4℃保存，其他试样于-18℃保存。

2．试样提取

准确称取约2.5g(精确至0.001g)试样于50mL离心管中，加0.5g氯化钠、0.5 mL盐酸溶液(1＋1)和0.5 mL乙醇，用15 mL和10mL乙醚提取两次，每次振摇1 min，于8000r/min离心3 min。每次均将上层乙醚提取液通过无水硫酸钠滤入25 mL容量瓶中。加乙醚清洗无水硫酸钠层，并收集至约25 mL刻度，最后用乙醚定容，混匀。准确吸取5 mL乙醚提取液于5 mL具塞刻度试管中，于35℃氮吹至干，加入2mL正己烷-乙酸乙酯(1+1)混合溶液溶解残渣，待气相色谱测定。

3．色谱条件

色谱柱：聚乙二醇毛细管气相色谱柱，内径320um，长30m，膜厚度0.25 um，或等效色谱柱。

载气：氮气，流速3 mL/min；空气：400L/min ;氢气：40L/min。

进样口温度：250℃；检测器温度：250℃

柱温程序：初始温度80℃，保持2min，以15℃/min的速率升温至250℃，保持5 min。

进样量：2 uL；分流比：10:1。

4．标准曲线制作

将混合标准系列工作液分别注入气相色谱仪中，以质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

5．试样溶液的测定

将试样溶液注入气相色谱仪中，得到峰面积，根据标准曲线得到待测液中苯甲酸、山梨酸的质量浓度。

（四）结果计算

式中X—试样中待测组分含量，g/kg;

ρ—由标准曲线得出的样液中待测物质的质量浓度，mg/L;

V—加入正己烷-乙酸乙酯(1+1)混合溶剂的体积，mL;

25—试样乙醚提取液的总体积，mL;

m—试样的质量，g；

5—测定时吸取乙醚提取液的体积，mL;

1000—由mg/kg转换为g/kg的换算因子。

结果保留三位有效数字。精密度要求在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

文章来源：《食品质量与安全检测技术》

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