2017年3月1日开始实施的GB 5009. 31-2016《食品安全国家标准食品中对羟基苯甲酸酯类的测定》规定了酱油、醋、饮料及果酱中对羟基苯甲酸酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯对羟基苯甲酸丁酯的测定。

(一)测定原理

试样酸化后，对羟基苯甲酸酚类用乙醚提取，浓缩近干用乙醇复溶，并用氢火焰离子化检测器气相色谱法进行分离测定，保留时间定性，外标法定量。

(二)试剂和仪器

1．试剂

①无水乙醚(C₂H₅OC₂H₅)：重蒸；无水乙醇(C₂H₅OH)：优级纯；无水硫酸钠。

②饱和氯化钠溶液：称取40g氯化钠加100mL水充分搅拌溶解。

③碳酸氢钠溶液(10g/L)：称取1g碳酸氢钠，溶于水并稀释至100mL。

④盐酸溶液(1：1)：取50mL盐酸，用水稀释至100mL。

⑤对羟基苯甲酸酯类标准储备液(1.00mg/mL)：准确称取对羟基苯甲酸甲酯(纯度≥99.8%)、对羟基苯甲酸乙酯(纯度≥99.7%)、对羟基苯甲酸丁酯(纯度≥99.7%)、对羟基苯甲酸丙酯(纯度≥99.3%)标准物质各0.0500g分别放置于50.0mL容量瓶中，用无水乙醇溶解并定容至刻度，置4℃左右冰箱保存，可保存1个月。

⑥对羟基苯甲酸酯类标准中间液(100ug/mL)：分别准确吸取上述对羟基苯甲酸酯类标准储备液1.0mL于10.0mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。临用时配制。

⑦对羟基苯甲酸酯类标准工作液1～5：分别吸取上述对羟基苯甲酸酯类标准中间液0.40、1.0、2.0、5.0、10.0mL于10.0mL容量瓶中，用无水乙醇稀释并定容。此即为4.0、10.0、20.0、50.0、100ug/mL的标准工作液1～5，临用时配制。

⑧对羟基苯甲酸酯类标准工作液6和标准工作液7 (200ug/mL和300 ug/mL)：分别吸取对羟基苯甲酸酯类标准储备液2.0mL和3.0mL于10.0mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。临用时配制。

2．仪器

气相色谱仪：具有氢火焰离子化检测器(FID)；天平：感量0.1mg和1mg;旋转蒸发仪、涡旋混匀器。

(三)测定步骤

1．取样及处理

①酱油、醋、饮料：称取5g(精确至0.001g)摇匀后的试样于小烧杯中，转移至125 mL分液漏斗中，用10 mL饱和氯化钠溶液分次洗涤小烧杯，合并洗涤液于125 mL分液漏斗，加入1mL 1 :l盐酸酸化，摇匀，分别以75、50、50mL无水乙醚提取三次，每次2min，放置片刻，弃去水层，合并乙醚层于250mL分液漏斗中，加入10mL饱和氯化钠溶液洗涤一次，再分别以碳酸氢钠溶液30、30、30mL洗涤三次，弃去水层。用滤纸吸去漏斗颈部水分，将有机层经过无水硫酸钠(约20g)滤入浓缩瓶中，在旋转蒸发仪上浓缩近干，用氮气除去残留溶剂，准确加入2.0mL无水乙醇溶解残留物，供气相色谱用。

②果酱：称取5g(精确至0.001g)事先均匀化的果酱试样于100mL具塞试管中，加入1mL 1 :1盐酸酸化，10mL饱和氯化钠溶液，涡旋混匀1～2min，使其为均匀溶液，再分别以50、30、30mL无水乙醚提取三次，每次2min，用吸管转移至250mL分液漏斗中，加入10mL饱和氯化钠溶液洗涤一次，再分别以碳酸氢钠溶液30、30、30mL洗涤三次，弃去水层。用滤纸吸去漏斗颈部水分，将有机层经过无水硫酸钠(约20g)滤入浓缩瓶中，在旋转蒸发仪上浓缩近干，用氮气除去残留溶剂，准确加入2.0mL无水乙醇溶解残留物，供气相色谱用。

2．色谱条件

色谱柱：弱极性石英毛细管柱，柱固定液为(5%)苯基-(95%)甲基聚硅氧烷，30m×0.32mm(内径)，0.25um(膜厚)或等效柱。

程序升温条件(如表3-4所示)：

表3-4 程序升温条件

进样口：温度220℃；进样量1L，分流比10:1(分流比可根据色谱条件调整)。

检测器：氢火焰离子化检测器(FID)，温度260℃。

载气：氮气，纯度99.99%，流量2.0mL/min，尾吹30mL/min(载气流量大小可根据仪器条件进行调整)。

氢气：40mL/min；空气：450mL/min(氢气、空气流量大小可根据仪器条件进行调整)。

3．标准曲线制作

将1.0uL的标准系列工作液分别注入气相色谱仪中，测定相应的不同浓度标准的峰面积，以标准工作液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

4.试样溶液测定

将1.0uL的试样溶液注入气相色谱仪中，以保留时间定性，得到相应的峰面积，根据标准曲线得到待测液中组分浓度；试样待测液响应值若超出标准曲线线性范围，应用乙醇稀释后再进样分析。

(四)结果计算

试样中对羟基苯甲酸含量按下式计算：

式中X—试样中对羟基苯甲酸的含量，g/kg;

P—由标准曲线计算出进样液中对羟基苯甲酸酯类的浓度，ug/mL ;

V—定容体积，mL;

f —对羟基苯甲酸酯类转换为对羟基苯甲酸的换算系数；

m—试样质量，g。

对羟基苯甲酸甲酯转换为对羟基苯甲酸的换算系数为0.9078；对羟基苯甲酸乙酯转换为对羟基苯甲酸的换算系数为0.8312;对羟基苯甲酸丙酯转换为对羟基苯甲酸的换算系数为0.7665;对羟基苯甲酸丁酯转换为对羟基苯甲酸的换算系数为0.7111。

结果保留三位有效数字，在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。

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文章来源：《食品质量与安全检测技术》

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