GB/T 5009. 20-2016于2017年3月1日正式实施，标准规定了豆类制品、生湿面制品、面包、糕点、醋、酱油中丙酸钠、丙酸钙测定的液相色谱和气相色谱两种方法。同时代替了GB/T 5009.120-2003《食品中丙酸钠、丙酸钙的测定》和GB/T 23382-2009《食品中丙酸钠、丙酸钙的测定高效液相色谱法》。

(一)液相色谱法

1．测定原理

试样中的丙酸盐通过酸化转化为丙酸，经超声波水浴提取或水蒸气蒸馏，收集后调pH，经高效液相色谱测定，外标法定量其中丙酸的含量。样品中的丙酸钠和丙酸钙以丙酸计，需要时可根据相应参数分别计算丙酸钠和丙酸钙的含量。

2．试剂和溶液

①硅油。

②磷酸溶液(1 mol/L )：在50 mL水中加入53.5mL磷酸，混匀后，加水定容至1000mL。

③磷酸氢二铵溶液(1.5g/L)：称取磷酸氢二铵1.5g，加水溶解定容至1000mL。

④丙酸标准储备液(10mg/mL)：精确称取250.0mg丙酸标准品(纯度≥97.0%)于25 mL容量瓶中，加水至刻度，4℃冰箱中保存，有效期为6个月。

3．仪器和设备

①高效液相色谱(HPLC)仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。

②天平：感量0. 0001g和0.01g。

③超声波水浴；离心机：转速不低于4000r/min；组织捣碎机、50 mL具塞塑料离心管、500mL水蒸气蒸馏装置、鼓风干燥箱、pH计。

4.测定步骤

(1)样品处理固体样品经组织捣碎机捣碎混匀后备用(面包样品在37℃下鼓风干燥2～3h进行，置于组织捣碎机中磨碎)，液体样品摇匀后备用。

①豆类制品、生湿面制品、醋、酱油等样品采用蒸馏法处理：样品均质后，准确称取25g(精确至0.01g)，置于500 mL蒸馏瓶中，加入100 mL水，再用50mL水冲洗容器，转移到蒸馏瓶中，加1 mol/L磷酸溶液20mL, 2～3滴硅油，进行水蒸气蒸馏，将250mL容量瓶置于冰浴中作为吸收液装置，待蒸馏至约240mL时取出，在室温下放置30min，用1 mol/L磷酸溶液调pH为3左右，加水定容至刻度，摇匀，经0.45 um微孔滤膜过滤后，待液相色谱测定。

②面包、糕点等样品用直接浸提法处理：准确称取5g(精确至0.01g)试样至100mL烧杯中，加水20mL，加入1 mol/L磷酸溶液0.5 mL，混匀，经超声浸提10min后，用1mol/L磷酸溶液调pH为3左右，转移试样至50mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。将试样全部转移至50mL具塞塑料离心管中，以不低于4000r/min离心10min，取上清液，经0.45um微孔滤膜过滤后，待液相色谱测定。

(2)色谱条件

①色谱柱：C₁₈ 柱，4.6mm×250mm, 5um或等效色谱柱。

②流动相：1.5g/L磷酸氢二铵溶液，用1mol/L磷酸溶液调pH为2.7～3.5(使用时配制)，经0.45 um微孔滤膜过滤。

③流速：1.0mL/min；柱温：25℃；进样量：20 uL；波长：214nm。

(3)色谱柱清洗参考条件实验结束后，用10％甲醇清洗1h，再用100％甲醇清洗1h。

(4)标准曲线绘制

①蒸馏法：准确吸取标准储备液0.5、1.0、2.5、5.0、7.5、10.0、12.5mL置于500mL蒸馏瓶中，其他操作同样品处理，其丙酸标准溶液的最终浓度分别为0.02、0.04、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/mL,经0.45um微孔滤膜过滤，浓度由低到高进样，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

②直接浸提法：准确吸取5.0mL标准储备液于50mL容量瓶中，用水稀释至刻度，配制成浓度为1.0mg/mL标准工作液。再准确吸取标准工作液0.2、0.5、1.0、2.0、3.0、 4.0、5.0mL至10mL容量瓶中，分别加入1 mol/ L磷酸0.2mL，用水定容至10mL，混匀。其丙酸标准溶液的最终浓度分别为0.02、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/mL，经0.45um微孔滤膜过滤，浓度由低到高进样，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

(5)试样溶液的测定处理后的样液同标准系列同样进机测试。根据标准曲线计算样品中的丙酸浓度。若待测样液中丙酸响应值超出标准曲线浓度线性范围则应稀释后再进样分析。

5．结果计算

式中X—样品中丙酸钠(钙)含量(以丙酸计)，g/kg;

ρ—由标准曲线得出的样液中丙酸的浓度，mg/mL;

V—样液最后定容体积，mL;

m—样品质量，g;

f—稀释倍数。

试样中测得的丙酸含量乘以换算系数1.2967，即得丙酸钠的含量；试样中测得的丙酸含量乘以换算系数1.2569，即得丙酸钙含量。

计算结果保留三位有效数字。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

文章来源：《食品质量与安全检测技术》

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