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氰苷是由腈醇(a-羟基腈)上的羟基和D-葡萄糖缩合而成的β-糖苷衍生物。氰苷广泛存在于豆科、蔷薇科、禾本科等的100多种植物中。含有氰苷的食源性植物有木薯、豆类和一些果树的种子如杏仁、桃仁、亚麻仁等。另外,一些鱼类如青鱼、草鱼、鲢鱼等的胆汁中也含有氰苷。常见的氰苷有苦杏仁苷(amygdalin)、亚麻苦苷(linamarin)、高粱苦苷(dhurrin)等。氰苷能通过生氰作用而产生毒性很强的氰氢酸(HCN),从而造成对入体的危害。
(一)检测原理
氰化物在酸性条件下被蒸出吸收于碱性溶液中。在pH 7.0的溶液中,用氯胺T将氰化物转变为氯化氢,再与异烟酸-吡唑酮作用生成蓝色,与标准系列进行比较定量。
(二)主要试剂及仪器
试银灵(对二甲氨基亚苄罗丹宁)、丙酮、异烟酸、氢氧化钠、吡唑酮、N-二甲基甲酰胺、氰化钾、乙酸锌、酒石酸、乙酸、氯胺T,均为分析纯。
蒸馏装置、721分光光度计。
(三)检测步骤
1.标准曲线的制作
(1)异烟酸-吡唑酮溶液的配制取1.5g异烟酸溶于24mL 2%氢氧化钠溶液中,加水至100mL。另取0.25g吡唑酮溶于200 mL N-二甲基甲酸胺中,合并上述两种溶液,混匀。
(2)氰化钾标准溶液的配制取0.25g氰化钾溶于水并定容至3000mL,使用前用0.1%氢氧化钠溶液稀释成1ug/mL氢氰酸,作为氰化钾标准溶液。
(3)标准曲线的绘制取0、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5mL氰化钾标准溶液于25 mL比色管中,用水补足至10 mL。于上述各比色管中各加1mL 1%氢氧化钠溶液和1滴酚酞指示剂,用1.5%乙酸调至红色消失。加5mL磷酸盐缓冲液(0.5mol/L, pH 7.0),置于37℃水浴中,再加入0.25 mL氯胺T溶液,混匀后保温5 min。加入5mL异烟酸-吡唑酮溶液,加水至25 mL,于20~40℃下放置40min。以2cm比色杯,零管调节零点后,于638nm处测吸光度,并绘制标准曲线。
2. 样品中氰化物提取
取10.0g样品,置于250mL蒸馏瓶中,加适量水使样品全部浸没。加20 mL乙酸锌(0.1g/mL) , 1~2g酒石酸。迅速连接好蒸馏装置,冷凝管下端插入5mL氢氧化钠溶液(0.1g/mL)中,开始蒸馏。收集馏出液近100mL,并定容至100 mL。
3.样品中氰化物的测定
取10mL提取液于25mL比色管中,按标准曲线制作方法进行比色。
4.样品中氰化物的含量计算
氰化物(以氢氰酸计)含量=A×V2/(V1×m)(mg/kg) (4-7)
式中A—从标准曲线上查得的氢氰酸的浓度;
m—样品质量,g;
V1—测定用蒸馏液体积;
V2—样品蒸馏液总体积。
(四)注意事项
(1)在氰化物的显色反应中,pH对显色结果影响较大,加入的磷酸盐缓冲液的pH要准确。
(2)氯胺T的有效含氯量对测定结果影响较大,氯胺T溶液应现用现配。
文章来源:《食品质量与安全检测技术》
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