二、食品中合成色素检验

上述食品中合成色素均为酸性、易溶于水，可以被聚酰胺和羊毛吸附，在碱性条件下又能解吸附，根据此特性，可以使之与天然色素分离。以羊毛为例，其表面有游离的氨基酸残基，在酸性条件下，带正电的氨基可吸附带负电的合成色素母体，而在碱性条件下氨基上的正电被中和，从而解吸出合成色素(图6-1)。聚酰胺粉的作用与羊毛相似。

目前合成色素的分析方法较多，主要有高效液相色谱法、薄层色谱法、示波极谱法、分光光度法、纸层析法等，其中前三种方法为国家标准方法(GB/T 5009.35)。

图6-1 羊毛对合成色素的吸附和解吸附

(一)高效液相色谱法

1．原理食品中的人工合成色素用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取，制备成水溶液，经高效液相色谱分离，紫外检测器检测，于254nm波长下测定，根据保留时间定性、峰面积标准曲线法定量。

2．分析步骤

(1)样品处理

1)橘子汁、果味水、果子露汽水等，试样中如含二氧化碳加热除去；配制酒类，样品加热除去乙醇；硬糖、蜜饯类、淀粉软糖，试样加水溶解，如pH较高，加柠檬酸调至pH 6左右。

2)色素提取：①聚酰胺吸附法：将上述样液用柠檬酸调至pH 6左右，加热，将粥状聚酰胺倒入样液中，混匀，用G3垂融漏斗抽滤，用pH4的温水、甲醇-甲酸混合溶液分别洗涤3～5次，去除天然色素，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸，收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，滤膜过滤，滤液待分析用；②液-液分配法(适用于含赤藓红的样品)：样品溶液经盐酸酸化，用三正辛胺-正丁醇混合溶液提取，饱和硫酸钠溶液洗涤，合并提取液，水浴浓缩后加入正己烷，用氨水提取。氨水提取液加乙酸调pH为中性，水浴蒸发近干，残渣溶解、定容，滤膜过滤，滤液待分析用。

(2)测定：色谱参考条件为C₁₈色谱柱(250mm×4.6mm,10um)；流动相：甲醇+0.02mol/L乙酸铵溶液(pH=4)；流速：1ml/min；检测器：紫外检测器，波长254nm。

3．方法说明本方法的检出限为：新红5ng,苋菜红6ng，柠檬黄4ng，胭脂红8ng，赤藓红18ng，日落黄7ng，亮蓝26ng;样品中如含有二氧化碳、乙醇，应加热除去；聚酰胺吸附色素后，可用温水去除可溶性杂质，用温水(pH=4)洗涤，防止合成色素被洗下来。

(二)薄层色谱法

1．原理水溶性酸性合成色素在酸性条件下被聚酰胺吸附，在碱性条件下解吸，再用薄层色谱法进行分离后，与标准比较进行定性和定量。

2．分析步骤

(1)样品处理：对于橘子汁、果味水、果子露汽水等样品，如含二氧化碳先加热除去；配制酒类，加热除去乙醇；硬糖、蜜饯类、淀粉软糖，加水溶解，如pH较高，加柠檬酸调至pH 4左右；奶糖，用乙醇-氨水溶液溶解，用硫酸调至微酸性，再加入硫酸、钨酸钠，使蛋白质沉淀，过滤，加水洗涤，滤液备用；蛋糕类，加入海砂，混匀，再加入石油醚洗涤三次，以去除脂肪，吹干、研细，用乙醇-氨水溶液在G3垂融漏斗中提取合成色素，以下处理同奶糖的处理方法。

将处理后的样液加热至70℃，加入聚酰胺粉，用柠檬酸溶液调节pH为4，将吸附有色素的聚酰胺转入G3垂融漏斗中过滤。用pH4的温水反复洗涤多次。若含有天然色素，需用甲醇-甲酸溶液洗涤，再用水洗至流出液为中性。然后用乙醇-氨水溶液解吸合成色素，收集解吸液，水浴除氨，浓缩后，用乙醇定容。

(2)测定：将试样处理液和标准溶液点样在聚酰胺薄层板上，检测苋菜红、胭脂红用甲醇-乙二胺-氨水(10+3+2)作展开剂；检测靛蓝、靓蓝用甲醇-氨水-乙醇(5+1+10)作展开剂；检测柠檬黄和其他着色剂用枸橼酸钠(25g/L)-氨水-乙醇(8+1+2)作展开剂。展开后，晾干，与标准进行比较定性。如需定量，将经薄层分离的色素从聚酰胺薄层板上取出，进行分光光度法测定。

3．方法说明本方法的最低检出量为5ug；样品中如含有二氧化碳、乙醇，应加热除去；检测不同色素时，要采用不同的展开剂。

相关链接：食品中着色剂检验（一）

文章来源：《食品理化检验》

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