(一)概述

铁是维持生命的重要物质，是制造血红素和肌血球素、促进维生素B族代谢的必要元素。人体缺铁会导致许多疾病，因而有多种铁制剂可供口服、或肌内或静脉注射用。但是在药物的生产过程中，由于设备和试剂的使用，极易引入铁元素或含铁物质。治疗剂量的铁无明显毒性，药物中的微量铁对人体更是安全的，但药物中铁残留量的多少可以反映产品纯度。另外，微量铁盐的存在可能会加速某些药物的氧化和降解。因此，铁盐检查法是药品纯度检查的一个重要项目。测定微量铁的方法有比色法、分光光度法、原子吸收光谱法、原子发射光谱法等。

各国药典铁盐限度检查常用的方法有硫氰酸盐和琉基醋酸比色法。《中国药典》和《美国药典》采用的是硫氰酸盐法，《英国药典》采用的是琉基醋酸法。

(二)原理

1.琉基醋酸法的原理药物中存在的三价铁离子与琉基醋酸在氨碱性溶液中生成红色配位化合物，与一定量的标准铁溶液经同法处理后产生的颜色进行比较，以判断药物中铁盐的限量。本法的灵敏度较高，但试剂较贵，不经济。

2Fe³⁺+2HSCH₂COOH→2Fe²⁺+HOOCH₂S SCH₂COOH+2H⁺

Fe²⁺+2HSCH₂COOH→Fe(SCH₂COOH)₂+2H⁺

Fe(SCH₂COOH)₂+20H^-→[Fe(SCH₂COO)₂]^2-(红色)+2H₂O

2．硫氰酸盐法的原理在酸性溶液中，药物中存在的三价铁离子与硫氰酸盐生成可溶性硫氰酸铁的红色配位化合物，与一定量的标准铁溶液经同法处理后产生的颜色进行比较，以判断药物中铁盐的限量。硫氰酸盐法的化学反应方程式如下：

Fe³⁺＋nSCN^-→[Fe(SCN)_n]^+3-n              (n＝1～b)

(三)检查法

1．供试品溶液的制备除另有规定外，取各品种项下规定量的供试品，置50ml纳氏比色管中，加水溶解使成25 ml。

2.对照溶液的制备取规定量的标准铁溶液(10ug/ml)，置另-50ml纳氏比色管中，加水使成25ml。

3. 检查法向上述两管中各加稀盐酸4.0ml、过硫酸铵50mg，加水稀释使成35ml，加30％硫氰酸铵溶液3.0ml，再加水至50ml,摇匀；以白色背景观察比较所产生的颜色。如供试管与对照管色调不一致，可分别移至分液漏斗中，各加正丁醇20ml振摇提取，俟分层后，将正丁醇层移至50ml纳氏比色管中，再用正丁醇稀释至25 ml，比较，即得。

(四)注意事项

1．加入稀盐酸的目的在中性或碱性溶液中，Fe³⁺水解形成水合羟基铁离子[Fe(H₂O)₅OH]²⁺或红棕色的氢氧化铁沉淀。本法中加入稀盐酸的目的是保持溶液的酸性以防止Fe³⁺水解，同时也可避免弱酸如醋酸盐、磷酸盐的干扰。由于硝酸有氧化性，会与SCN^-反应：

3SCN^-＋13NO₃^-＋10H⁺→3SO₄^2-+3CO₂↑+16NO↑+5H₂O

另外，如果硝酸中含有亚硝酸，可与SCN^-作用，生成红色亚硝酰硫氰化物(NO·SCN)，影响比色，故合适的酸化试剂为稀盐酸。

2．加过硫酸铵[(NH₄)₂S₂O₈]的目的过硫酸铵为氧化剂，可将供试品中的Fe²⁺氧化成Fe²⁺，同时可防止由于光照使硫氰酸铁还原或分解褪色。有些药物(如葡萄糖、糊精、碳酸氢钠、硫酸镁等)也可通过加硝酸使供试品中的Fe²⁺氧化成Fe³⁺，但采用这种方法时须加热煮沸除去硝酸中的亚硝酸，否则亚硝酸能与硫氰酸根离子作用，生成红色亚硝酞硫氰化物，影响比色。

HNO₂+SCN^-+H⁺→NO·SCN＋H₂O

3．加入过量硫氰酸铵的目的由于铁盐和硫氰酸根离子的反应为可逆反应，加过量硫氰酸铵使反应向正方向进行，提高反应的灵敏度和生成的配位离子的稳定性，而且还可以消除氯化物等与铁离子生成配离子的物质所引起的干扰。

4．最适检出浓度经试验，在50ml溶液中含铁盐5～90ug时，吸收度与浓度呈现良好的线性关系，而目视比色较为适宜的范围是50ml溶液中含Fe³⁺ 10～50ug，在此范围内显色梯度明显，易于区别。

5．干扰物的排除

(1)干扰离子的排除：SCN^-能与某些金属离子生成配位化合物或有色沉淀，而某些阴离子也可与Fe³⁺反应而影响比色。

1)当存在一定量的氯化物时，可通过加入过量的硫氰酸铵来减小其产生的影响。

2) PO₄^3-可与Fe³⁺生成稳定的无色配位化合物，而使硫氰酸铁颜色消褪。若PO₄^3-含量在300mg以下，可通过止丁醇提取比色来减小其影响；若PO₄^3-含量＞300mg，提高溶液酸度(50ml溶液中加入盐酸5ml)，再用正丁醇提取比色，也可使干扰减弱；但若PO₄^3-含量达900mg时，以上两种方法均不能减弱干扰。

3)枸橼酸盐可与铁盐生成稳定的配位化合物而使结果偏低。经试验，当溶液中含枸橼酸盐(以C₆H₅O₇^3-计)400mg时，以正丁醇提取后比色，分别加稀盐酸4m1和加盐酸3ml两种酸度比较，前者结果降低2%，后者则降低5.5%；而当溶液中含枸橼酸盐600mg时，加盐酸3ml较加稀盐酸4ml为好。说明当供试品溶液中的枸橼酸浓度较高时，应适当提高溶液酸度，以使干扰减小。

4)亚硝酸可与硫氰酸盐作用生成红色的亚硝酞硫氰化物，使结果偏高。经试验，亚硝酸含量较低时，过硫酸铵可减小干扰；若亚硝酸含量较高，在加入过硫酸铵前，加热煮沸1分钟可消除干扰。硫酸盐对本方法的干扰较明显，试验表明，当溶液中的硫酸盐(以SO₄^2-计)达400mg时，本方法不能使干扰减弱。

(2)具有环状结构的有机药物，在试验条件下不溶解或对检查有干扰，需经炽灼破坏，使铁盐呈Fe₂O₃存在。如盐酸普鲁卡因，经700～800℃炽灼破坏处理后再依法比色检查。

(3)样品管与标准管色调不一致或所呈硫氰酸铁的颜色较浅时，可加入正丁醇20ml提取，分取正丁醇层进行比色。硫氰酸铁的配位化合物在正丁醇中的溶解度增大，故能增加颜色深度，并能排除干扰。

相关链接：药品中微量硫化物检查法

文章来源：《实用化学药品检验检测技术指南》

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