砷盐是有毒的物质，多由药物生产过程所使用的无机试剂引入。砷盐和重金属一样，在多种药物中要求检查。虽然重金属检查法可同时检测砷，但因其毒性大，且易引入药物中，故须采用灵敏度高、专属性强的砷盐检查法进行专项考察和严格控制其限量。《中国药典》2015年版采用古蔡氏(Gutzeit)法和二乙基二硫代氨基甲酸银法(silver diethyldithio-carbamate，简称Ag-DDC法)法检查药物中微量的砷，两法并列，根据需要可任意选用。

《美国药典》(USP38) ,《日本药局方》(JP16)均采用Ag-DDC法，《欧洲药典》(EP8.0)和《英国药典》(BP2016)采用古蔡氏法和次磷酸法。

(一)第一法(古蔡氏法)

1．原理利用金属锌与酸作用产生新生态氢，与药品中的微量亚砷酸盐反应生成具挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸产生黄色至棕色的砷斑，与相同条件下一定量的标准砷溶液所产生的砷斑比较，以判定砷盐的限量。反应式如下：

AsO₃^3-＋3Zn+9H⁺→AsH₃↑+3Zn²⁺+3H₂O

As³⁺+3Zn+3H⁺→AsH₃↑+3Zn²⁺

AsH₃+2HgBr₂→2HBr+AsH(HgBr)₂(黄色)

AsH₃＋3HgBr₂→3HBr＋As(HgBr)₃(棕色)

2．检查法

(1)标准砷斑的制备：精密量取标准砷溶液2ml，置A瓶中，加盐酸5 ml与水21ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将照上法装妥的导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置25～40℃水浴中，反应45分钟，取出溴化汞试纸，即得。

若供试品需经有机破坏后再检砷，则应取标准砷溶液代替供试品，照该品种项下规定的方法同法处理后，依法制备砷斑。

(2)样品砷斑的制备：取按各品种项下规定方法制成的供试品溶液，置A瓶中，照标准砷斑的制备，自“再加碘化钾试液5ml”起，依法操作。将生成的砷斑与标准砷斑比较，颜色不得更深。

3．注意事项

(1)因试剂及供试品中可能含有少量硫化物，在酸性溶液中产生硫化氢气体，与溴化汞作用生成硫化汞色斑而干扰试验，故用醋酸铅棉花吸收硫化氢。醋酸铅棉花用量过多或塞得过紧会影响砷化氢的通过；反之，太少或太松则不能除尽硫化氢。经试验，称取醋酸铅棉花0.1g，装管高度约80mm，在1000ug S^2-存在下也不干扰测定。考虑到药物中存在的S^2-量不会很多，故《中国药典》2015年版规定称取60mg醋酸铅棉花，装管高度为60～80mm，这样既控制了醋酸铅棉花填充的松紧度，除去硫化物的干扰，又可使砷化氢以适宜速度通过导气管℃。

(2)溴化汞试纸与砷化氢作用较氯化汞试纸灵敏，其灵敏度为1ug(以As₂O₃计)，但所呈的砷斑不稳定。在反应中尽可能保持干燥及避免强光，反应完毕后应立即与标准砷斑比较。制备溴化汞试纸的滤纸采用一般定性滤纸即可，若用定量试纸，以中速为宜。

(二)第二法(二乙基二硫代氨基甲酸银法)

1．原理金属锌与酸作用产生新生态氢，与微量砷盐反应生成具挥发性的砷化氢，还原二乙基二硫代氨基甲酸银，产生红色胶态银，与相同条件下一定量的标准砷溶液所产生的红色胶态银用目视比色法或在510nm波长处测定吸光度进行比较，以判定砷盐的限量或含量。反应式如下：

其中，Ag(DDC)的结构为：

2．检查法

(1)标准砷对照液的制备：精密量取标准砷溶液2ml，置A瓶中，加盐酸5 ml与水21 ml,再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将照上法装妥的导气管C密塞于A瓶上，使生成的砷化氢气体导入盛有Ag-DDC溶液5.0ml的D管中，并将A瓶置25～40℃水浴中，反应45分钟，取出D管，添加三氯甲烷至刻度，混匀，即得。

若供试品需经有机破坏后再检砷，则应取标准砷溶液代替供试品，照该品种项下规定的方法同法处理后，依法制备砷对照液。

(2)样品检查：取按各品种项下规定方法制成的供试品溶液，置A瓶中，照标准砷对照液的制备，自“再加碘化钾试液5ml”起，依法操作。将所得溶液与标准对照液同置白色背景上，从D管上方向下观察、比较，所得溶液的颜色不得比标准砷对照液更深。必要时，可将所得溶液分别移至1cm吸收池中，以Ag-DDC试液为空白，照紫外-分光光度法（通则0401)于510nm波长处以二乙基二硫代氨基甲酸银试液为空白测定吸光度，供试溶液的吸光度不得大于标准砷对照液的吸光度。

3.注意事项

(1)为使上述反应定量地进行，在Ag-DDC中加入一定量的有机碱是必要的。美国及日本均采用Ag-DDC吡啶试液吸收反应中产生的二乙基二硫代氨基甲酸，但吡啶的恶臭对操作者有害。

(2)由于砷化氢气体导入盛有准确的 5ml Ag-DDC试液的D管中，在25～40℃水浴中反应45分钟后，有部分三氯甲烷挥发，故在比色前应添加三氯甲烷至5.00m1 ,混匀后，至白色背景上，从D管上方向下观察，以增加液层的厚度，便于判断结果。此外，因Ag-DDC试液呈浅黄绿色，应考虑背景补偿，故测吸光度时以Ag-DDC-二乙胺-三氯甲烷液作为空白溶液。

4．供试品的预处理方法

(1)通常，供试品为可溶于水的脂肪族有机酸如枸橼酸、乳酸及其盐、葡萄糖酸钙等有机药物，以及可溶于水或酸中的无机药物如氯化钠、氧化锌等时，一般不经过有机破坏直接依法检查砷盐。但多数环状结构的有机药物如酚磺酞、糖精钠等，因砷与杂环分子可能以共价键结合，需要先行有机破坏，否则检出结果偏低或难以检出。常用的有机破坏方法有碱破坏法和酸破坏法。《中国药典》采用碱破坏法，如右旋糖酐铁、布美他尼、呋塞米等化学药和辅料检查砷盐时，于供试品中加氢氧化钙先小火灼烧使炭化，再于 500～600℃炽灼至完全灰化。环状结构的有机酸碱金属盐如对氨基水杨酸钠、芬布芬等5种化学药和苯甲酸钠用石灰法不能破坏完全，需用无水碳酸钠进行碱融破坏。此外，苯溴马隆、盐酸卡替洛尔等化学药和轻质液状石蜡用硝酸镁乙醇溶液进行灼烧破坏分解有机物，使砷生成非挥发性焦砷酸镁[Mg₃(AsO₄)₂]，残渣质轻，加盐酸后易于溶解。本法操作简便，易于灰化；用于有机药物破坏后砷能定量回收；但操作中需注意充分灰化，使硝酸镁完全分解为氧化镁。若有硝酸盐或亚硝酸盐残留，则在酸性液中能生成硝酸或亚硝酸，影响砷化氢的生成。

(2)供试品若为硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐等，在酸性溶液中生成硫化氢或二氧化硫气体，与溴化汞作用生成黑色硫化汞或金属汞，干扰砷斑检查。应先加硝酸处理，使其氧化成硫酸盐，除去干扰。例如解毒药硫代硫酸钠中砷盐的检查：取本品0.20g，加水5m1溶解后，加硝酸3ml，置水浴上，注意蒸干，残渣中加水数毫升，搅匀，滤过，滤渣用水洗净，合并滤液与洗液，蒸干后，加盐酸5m1与水23 ml使溶解，按古蔡氏法检查。

(3)供试品若为铁盐，能消耗碘化钾、氯化亚锡等还原剂，影响测定条件，并能氧化砷化氢干扰测定。如检查枸橼酸铁铵中的砷盐，需先加酸性氯化亚锡试液将高铁离子还原为低铁离子后再检查。

(4)供试品中可能存在的五价砷在酸性溶液中也能被金属锌还原为砷化氢，但速度较慢，故在反应液中加入碘化钾和氯化亚锡为还原剂，使五价砷还原为三价砷，同时生成碘，氧化生成的碘又可被氯化亚锡还原为碘离子。溶液中的碘离子与反应产生的锌离子形成稳定的配位离子，有利于生成砷化氢的反应不断进行。反应式如下：

AsO₄^3-＋2I^-＋2H⁺→AsO₃^3-＋I₂+H₂O

AsO₄^3-＋Sn²⁺+2H⁺→AsO₃^3-＋Sn⁴⁺+H₂O

I₂+Sn²⁺→2I^-＋Sn⁴⁺

4I^-＋Zn²⁺→[ZnI₄]^2-

氯化亚锡与碘化钾还可抑制锑化氢的生成，因锑化氢也能与溴化汞试纸作用生成锑斑或与Ag-DDC试液反应，干扰砷盐检查。氯化亚锡又可与锌作用，在锌粒表面形成锌锡齐，起去极化作用，从而使氢气均匀而连续地发生。

(5)含锑药物如葡萄糖酸锑钠用古蔡氏法检查砷时，锑盐也可被还原为锑化氢，与溴化汞试纸作用，产生灰色锑斑，干扰砷斑的检出。

SbH₃+HgBr₂→SbH₂(HgBr)+HBr

可改用白田道夫(Bettendorff)法检查砷盐。方法的原理是氯化亚锡在盐酸中将砷盐还原成棕褐色的胶态砷，与一定量的标准砷溶液用同法处理后的颜色比较，可控制供试品中的砷量。

2As³⁺+3SnC1₂+6HC1→2As↓+3SnC1₄+6H⁺

少量二氯化汞的加入能提高反应的灵敏度。

(三)标准砷溶液的制备

称取三氧化二砷0.132g，置于1000ml量瓶中，加20%氢氧化钠溶液5ml溶解后，用适量的稀硫酸中和，再加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液(每1ml含As的量为0.1mg)。临用前，精密量取贮备液10ml，置1000ml量瓶中，加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，即得标准砷溶液(每1ml含As的量为1ug)。具体计算如下：

由于1 mol三氧化二砷(As₂O₃)的质量为197.82g，含砷(As)为2×74.92g，故0.132g三氧化二砷中的含As量为：

1ml贮备液中的含As量为：

稀释后，每ml标准砷溶液中的含As量为：

药物的含砷限量可以用砷或三氧化二砷计算。《中国药典》2015年版第一法采用以砷计算，规定标准为2ug砷(相当于标准砷溶液2m1)制备所产生的砷斑，供试品的砷斑不得比标准砷斑更深；药典第二法也采用砷计算，规定标准为2ug砷(相当于标准砷溶液2m1)制备的对照液，供试品的颜色或吸光度不得更深或更大。

(四)注意事项

1.醋酸铅棉花系取脱脂棉1.0g，浸入醋酸铅试液与水的等容混合液12m1中，湿透后，挤压除去过多的溶液，并使之疏松，在100℃以下干燥后，贮于玻璃瓶中备用。

2.氢气发生的速度过缓或过于剧烈，都将影响砷化氢的逸出速度，使砷斑的色泽和清晰度受影响，难于判定检查结果。而氢气的发生速度与溶液的酸度、锌粒的粒度与用量及反应温度等有关。试验结果表明，供试液的酸浓度为2mol/L,碘化钾的浓度为2.5%，氯化亚锡的浓度为0.3%，加入试液后在室温放置10分钟，再加锌粒(10目)2g，立即密塞导气管，发生瓶置25～40℃水浴中反应45分钟较为适宜。如使用的锌粒较大时，用量要酌情增加，反应时间亦可延长为1小时。本法所用的锌粒应无砷。

3．制备标准砷斑或标准砷对照溶液时，应与供试品检查同时进行。

4．所用仪器和试液等照本法检查，均不应生成砷斑，或至多生成仅可辨认的斑痕。

5．各供试品中规定的含砷限量不同，采用改变供试品取用量的方法来适应要求，而不是采用改变标准砷溶液取用量的办法，囚标准砷斑过深或过浅都会影响比色的准确性。例如药典规定某药品的含砷量不得超过0.0001%(百万分之一)，则应取供试品2.0g与标准砷斑比较，而不是取供试品1.0g与标准砷溶液1 ml所产生的砷斑进行比较。

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文章来源：《实用化学药品检验检测技术指南》

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