高效液相色谱仪器种类很多，根据其功能的不同，主要可分为分析型、制备型和专用型。虽然不同类型的仪器性能各异，应用范围不同，但其基本组成是相似的，主要由输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录以及数据处理系统组成，包括储液瓶、高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器以及记录仪等主要部件，此外还可根据需要配置流动相在线脱气装置、梯度洗脱装置、自动进样系统、柱后反应系统等。图14-2为典型高效液相色谱仪结构示意图。

图14-2 高效液相色谱仪结构示意图

(一)输液系统

输液系统由储液瓶、高压泵、过滤器、阻尼器、梯度洗脱装置等组成，其核心部件是高压泵，作用是向色谱柱提供高压、流速稳定的流动相。

根据排液性质，高压泵可分为恒压泵和恒流泵两大类，按工作方式又可分为液压隔膜泵、气动放大泵、螺旋注射泵和柱塞往复泵四种，前两种为恒压泵，后两种为恒流泵。恒压泵输出液流的压力稳定，而流量随外界阻力的变化而变化，不适用于梯度洗脱，已逐渐被恒流泵取代。恒流泵在一定的操作条件下，输出的流量保持恒定，柱阻力或流动相黏度的改变只引起柱前压的变化。目前，绝大多数的高效液相色谱仪所采用的是柱塞往复泵，因为它液缸容积小，易于清洗和更换溶剂，特别适用于梯度洗脱。改变电机转速能方便地调节流量，流量不受柱阻的影响，其主要缺点是输出的脉冲性较大，现多采用双泵系统来克服。

(二)进样系统

进样系统是将分析试样定量引入色谱仪的装置，按进样方式可分为注射器进样、阀进样和自动进样三种。

注射器进样与气相色谱类似，使微量注射器的针尖穿过进样器的弹性隔膜垫片，将样品以小液滴的形式送到柱床顶。由于注射器进样存在进样重复性差等局限性，现已几无应用。

高压进样阀由阀体、转子、定子、密封垫、定量管、手柄等构成。阀进样工作原理：当阀处于“载样”位置(LOAD)时，将样品充满定量管，但不与柱接通，多余的样品从放空孔排出(图14-3位置1)；然后将阀迅速旋转60^o，使阀处于“进样”位置(INJECT)，阀与液相流路接通，由高压泵输送的流动相进定量管，将管中的样品送入色谱柱中(图14-3位置2)。阀进样能够在高压下直接进样，不需要停流，进样量可变范围大，重现性好，但死体积较大，容易引起峰型扩展。

图14-3 阀进样示意图

自动进样器是由计算机自动控制定量阀，取样、进样、复位、清洗和样品盘转动等一系列操作全部按预定程序进行，操作者只需将样品按顺序装入储样装置。该法适合于大量样品的分析，可实现自动化操作，节省人力，也是目前HPLC仪器的主流配置。

(三)分离系统

分离系统主要是指色谱柱，样品在此完成分离。色谱柱由柱管、填料、压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、接头、螺丝等构成。色谱柱按用途可以分为分析型和制备型，规格如下：

常规分析柱，内径2～5mm(常用4.6mm)，柱长10～30cm ;

窄径柱，内径1～2mm，柱长10～20cm;

毛细管柱，内径0.2～0.5mm;

半制备柱，内径＞5mm;

实验室制备柱，内径20～40mm，柱长10～30cm;

生产制备柱，内径可达几十厘米。

内径一般根据柱长、填料粒径和折合流速来确定，目的是避免管壁效应。

色谱柱填料的特性确定了色谱柱的性能，如填料颗粒的大小、形状、均匀性、表面积、孔径等均影响柱效。目前HPLC分析中最常用的填料主要是薄壳型和全多孔型，薄壳型填料传质速度快，有较高的柱效和分析速度，对大分子有很好的分离效能，但比表面积小，柱容量低；全多孔型填料筛分范围小，粒度均匀，柱效高，柱容量大，应用的也最为普遍。

(四)检测系统

检测器是色谱仪的三大关键部件之一，用于连续监测柱后流出物组成和含量变化的装置，其作用是将色谱柱中流出的样品组分含量随时间的变化，转化为易于测量的电信号。理想的HPLC检测器应具有灵敏度高、重现性好、响应快、线性范围宽、死体积小等特性。目前，应用最多的是紫外检测器(UVD)，其次是荧光检测器(FD)、电化学检测器(ECD)和蒸发光散射检测器(ELSD)。示差折光检测器(RID)虽然是通用型检测器，但因受温度影响较大，灵敏度不够高等原因极少应用。蒸发光散射检测器是通用型检测器，理论上可用于挥发性低于流动相的任何样品组分，但由于灵敏度较低，因而在药物检测中的应用也很有限。常用HPLC检测器性能比较见表14-1。

表14-1 常用HPLC检测器性能比较

文章来源：《实用化学药品检验检测技术指南》

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