测定拉曼光谱可以采用以下任一物质态：结晶态、无定形、液体、气体或等离子体。

液体能够在玻璃管或石英管中直接测量，无定形和微晶固体也可充填入玻璃管或石英管中直接测定。为了获得较大的拉曼散射光强度，通常使照射在样品上的入射光与所检测的拉曼散射光之间的夹角为0^o、90^o 和180^o。样品池的放置可有多种方式。

除另有规定外，一般用作鉴别的样品不必制样，用作晶型、异构体限度检查或含量测定时，供试品的制备和具体测定方法应研究并作出规定。

某些特殊样品技术可被应用于表面增强拉曼光谱和显微拉曼光谱测量。

为防止样品分解，常采用的办法是旋转技术。利用特殊的装置使激光光束的焦点和样品的表面做相对运动，从而避免了样品的局部过热现象。样品旋转技术除能防止样品分解外，还能提高分析的灵敏度。

常采用内标法定量，在激光照射下，加入的内标也产生拉曼光谱，选择其一条拉曼谱带作为标准，将样品的拉曼谱带强度与内标的谱带强度进行比较(通常比较谱带的面积或高度)。由于内标和样品完全处于相同的实验条件下，一些影响因素可以相互抵消。

所选择的内标应满足以下要求：①化学性质比较稳定，不与样品中的被测成分或其他成分发生化学反应；②内标的拉曼谱带和待测物的拉曼谱带互不干扰；③内标应比较纯，不含有被测成分或其他干扰成分。对于非水溶液，常用的内标为四氯化碳(459cm^-1)；而对于水溶液，常用的内标为硫酸根离子、硝酸根离子(1050cm^-1)和高氯酸根离子。对于固体样品，有时选择样品中的某一拉曼谱带作为自身对照内标谱带。

具有多晶型现象的固体药品，由于晶型不同，可能导致所收集的供试品光谱图与对照品光谱图或标准光谱集所收载的光谱图不一致，遇此情况，应按该品种项下规定的方法进行预处理后再绘制比对。

光谱的性状与所用的仪器型号和性能、激发波长、样品测定状态及吸水程度等因素相关。因此，进行光谱比对时，应考虑各种因素可能造成的影响。

必须对方法进行验证，至少应考察准确度、精密度等主要指标。但这些指标受诸多可变因素的影响，其中荧光可能是影响方法适用性的主要因素。样品中荧光杂质的存在完全随样品而异，所以方法必须能适用不同的样品体系，必须足以将杂质的影响降到最小。

检测器的线性必须适用可能的信号水平范围。荧光可能使信号基线比验证时高，这时必须设法将荧光减弱或者使验证的方法适用于较高的荧光水平。这一要求对方法的精密度、检测限(LOD)和定量限(LOQ)同样适用，囚为基线噪声的增加会对这些数值产生影响。

由于荧光使基线漂移可能同样会影响定量，所以使用时，同样需要在不同的光漂白作用水平进行可接受的定量验证。

必须确定激光是否对样品造成影响。在不同的激光功率和暴露时间的条件下，对样品目视检查和仔细审视测得的拉曼光谱可以确定样品是否改变(而不是光漂白作用)。观察的依据是谱带位置、峰强和谱带宽度是否改变或者背景强度是否有明显变化。

影响方法精密度的因素还包括样品的位置和固体、液体样品的形态，在校正模型中必须严密控制或说明。样品的制备方法或样品试架的形状可能影响测量的灵敏度，而且该灵敏度会随着仪器的激发光和采集光学设置的不同而不同。

和红外光谱一样，拉曼光谱在药物分析中可用于定性鉴别和定量测定，特别适用于红外光谱定性困难或不能完成的样品。定性鉴别时，主要着眼于供试品光谱与对照光谱全谱的比较，即首先是谱带的有与无，然后是各谱带的相对强弱。若供试品的光谱图与对照的光谱图一致，通常可判定两个化合物为同一物质(只有少数例外，如有些光学异构体或大分子同系物等)。若两个光谱不同，则可判定两个化合物不同。但下此结论时，须考虑供试品是否存在多晶型现象、纯度如何，以及其他外界因素的干扰。

文章来源：《实用化学药品检验检测技术指南》

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