1 范围

本标准规定了牛肉、羊肉、猪肉、鸡肉和兔肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量液相色谱-紫外检测法。

本标准适用于牛肉、羊肉、猪肉、鸡肉和兔肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定。

本标准的方法检出限：土霉素、四环素、金霉素、强力霉素均为0.005mg/kg。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分：总则与定义(GB/T 6379.1-2004，ISO 5725-1：1994，IDT)

GB/T 6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T 6379.2-2004,ISO 5725-2:1994,IDT)

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-1992,neq ISO 3696:1987)

3 原理

用0.1 mol/L Na₂EDTA-Mcllvaine(pH=4.0±0.05)缓冲溶液提取可食动物肌肉中四环素族抗生素残留，提取液经离心后，上清液用Oasis HLB或相当的固相萃取柱和羧酸型阳离子交换柱净化，液相色谱-紫外检测器测定，外标法定量。

4 试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1 甲醇：色谱纯。

4.2 乙腈：色谱纯。

4.3 乙酸乙酯：色谱纯。

4.4 磷酸氢二钠：优级纯。

4.5 柠檬酸(C₆H₈O₇·H₂O)。

4.6乙二胺四乙酸二钠(Na₂EDTA·2H₂O)。

4.7 草酸。

4.8 磷酸氢二钠溶液：0.2mol/L。称取28.41g磷酸氢二钠(4.4)，用水溶解，定容至1000 mL。

4.9 柠檬酸溶液：0.1 mol/L。称取21.01 g柠檬酸(4.5)，用水溶解，定容至1000 mL。

4.10 Mcllvaine缓冲溶液：将1000 mL 0.1 mol/L柠檬酸溶液(4.9)与625 mL 0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液(4.8)混合，必要时用NaOH或HCl调pH=4.0±0.05。

4.11 Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液：0.1 mol/L。称取60.5g乙二胺四乙酸二钠(4.6)放入1625 mL Mcllvaine缓冲溶液(4.10)中，使其溶解，摇匀。

4.12 甲醇+水(1+19)：量取5 mL甲醇(4.1)与95 mL水混合。

4.13 流动相：乙腈＋甲醇+0.01 mol/L草酸溶液(2+1+7)。

4.14 土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准物质：纯度≥95％。

4.15 土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准储备溶液：0.1 mg/mL。准确称取适量的土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准物质(4.14)，分别用甲醇配成0.1 mg/mL的标准储备液。储备液于-18℃贮存。

4.16 土霉素、四环素、金霉素、强力霉素混合标准工作溶液：根据需要用流动相将土霉素、四环素、金霉素、强力霉素稀释成5 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL不同浓度的混合标准工作溶液，混合标准工作溶液当天配制。

4.17 Oasis HLB固相萃取柱或相当者：500 mg, 3 mL。使用前分别用5 mL甲醇和10 mL水预处理，保持柱体湿润。

4.18 阳离子交换柱：羧酸型，500 mg, 3 mL。使用前用5 mL乙酸乙酯预处理，保持柱体湿润。

5 仪器

5.1 液相色谱仪：配有紫外检测器。

5.2 分析天平：感量0.1 mg，0.01g。

5.3 液体混匀器：

5.4 固相萃取装置。

5.5 贮液器：50 mL

5.6 高速冷冻离心机：最大转速13000 r/min。

5.7 刻度样品管：5 mL，精度为0.1 mL。

5.8 真空泵：真空度应达到80 kPa。

5.9 振荡器。

5.10 平底烧瓶：100 mL。

5.11 pH计：测量精度±0.02。

6 试样的制备与保存

6.1 试样的制备

从全部样品中取出有代表性样品约1 kg，充分搅碎，混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内。密封作为试样，标明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含鼻的变化。

6.2 试样保存

将试样于-18℃冷冻保存。

文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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