5 仪器

5.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。

5.2 组织捣碎机。

5.3 匀浆机：转速大于或等于8000r/min。

5.4 涡旋振荡器。

5.5 离心机：转速大于或等于4000r/mln。

5.6 减压旋转蒸发仪。

5.7 超声波水浴。

5.8 分析天平：感量0.1 mg，0.01g。

6 制样方法

从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约500g，用组织捣碎机充分捣碎均匀，装入洁净容器中，密封，并标明标记，于-18℃以下冷冻存放。

制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

7 分析步骤

7.1 提取

称取2g样品(准确至0.01g)，于50 mL离心管中，加入20 mL乙酸乙酯(4.1)、0.15 mL 50％氢氧化钾溶液(4.15)、1mL 1% BHT溶液(4.12)置超声波水浴中振荡5 min，匀浆机上8000r/min均质30s，加入1g无水硫酸钠，混匀，4000r/min离心5 min，清液转移至100 mL梨形瓶中；另取一离心管，加入20 mL乙酸乙酯,0.15 mL 50％氢氧化钾溶液和1 mL 1％BHT溶液洗涤匀浆机刀头；用玻棒捣碎离心管中的沉淀，加入上述洗涤匀浆机刀头的碱性乙酸乙酯溶液，在涡旋振荡器上振荡2 min，置超声波水浴中振荡5 min, 4000r/min离心5 min，清液合并至100mL梨形瓶中，38℃减压旋转蒸发至干。

7.2 净化

上述残渣马上用1.5 mL乙腈溶解，涡旋混匀，超声5 min，加入1.5 mL 0.1 mol/L盐酸溶液(4.13),涡旋混匀，转移到15 mL离心管，加5 mL正己烷(4.2)洗涤梨形瓶，合并转移到离心管中，涡旋混匀，4000r/min离心5 min，弃上层正己烷层，加入3 mL正己烷重复操作一次。

脱脂后的样液加入3 mL 0.1mol/L盐酸溶液，涡旋混匀，注入已活化处理的MCX固相萃取柱(4.20)，依次用5 mL 0.1 mol/L盐酸溶液、5 mL甲醇(4.3)淋洗，15 mL 10%氨乙腈溶液(4.16)洗脱，洗脱液38℃减压旋转蒸发至干，残渣加入0.5 mI)乙腈，置超声波水浴中振荡5 min，加入1.5 mL 0.025 mol/L乙酸铵溶液(4.17),涡旋混匀，吸取100uL该样液，加入1900 uL乙腈-水(1+4)混匀后过0.2 um滤膜(4.21)，供液相色谱-串联质谱仪测定。

7.3 测定条件

7.3.1 液相色谱参考条件

a)色谱柱：YMC C₁₈, 3 um, 150 mm×2.1 mm(内径)或相当者；

b)流动相：乙腈;0.005 mol/L甲酸溶液(4.14)，梯度洗脱；乙腈,15％～80％(7min内线性增加),80％保持2 min,80%～15％(0.01 min内线性递减),15％保持11 min;

c)流速：0.25 mL/min;

d)柱温,40℃；

e)进样量：5uL。

7.3.2 质谱参考条件

a)离子化模式：电喷雾电离正离子模式(ESI+)；

b)质谱扫描方式：多反应监测(MRM)；

c)分辨率：单位分辨率；

d)雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体，使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求，喷雾电压、去集簇电压、碰撞能等电压值应优化至最佳灵敏度；

e)16种苯并咪唑类药物的定性离子对、定量离子对和去集簇电压、碰撞气能量、参考保留时间见表1。

表1 16种苯并咪唑类药物和代谢物的参考保留时间、参考质谱参数

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文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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