1 范围

本标准规定了河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中氯霉素(chloramphenicol)、甲砜霉素(thiamphenicol)和氟苯尼考(florfenicol)及其代谢物氟苯尼考胺(florfenicol amine)残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺残留量的测定。

本标准的方法检出限：河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中氯霉素为0.1ug/kg，甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺为1.0 ug/kg。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分：总则与定义(GB/T 6379.1-2004,ISO 5725-1：1994，IDT)

GB/T 6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T 6379.2-2004,ISO 5725-2:1994,IDT)

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-2008,ISO 3696:1987,MOD)

3 原理

样品中的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺在碱性条件下，用乙酸乙酯提取，提取液旋转凳发挥干，残渣以水溶解，经正己烷液液分配脱脂。液相色谱-串联质谱仪检测，氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考以内标法峰面积定量，氟苯尼考胺以外标法峰面积定量。

4 试剂

所用试剂除注明外均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1 甲醇：色谱纯。

4.2 乙酸乙酯。

4.3 正己烷。

4.4 氨水：25％～28％。

4.5 无水硫酸钠：使用前经650℃灼烧4 h。

4.6 标准物质：氯霉素(CAS : 56-75-7)、甲砜霉素(CAS:15 318-45-3)和氟苯尼考(CAS: 76639-94-6)，纯度≥99.5％;氟苯尼考胺，纯度≥98.0％。

4.7 内标标准液：氘代氯霉素(d5-氯霉素),100 ug/mL,溶剂为乙腈，氘化度≥98％。

4.8 100 ug/mL标准储备液：分别准确称取适量的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺标准物质(4.6)，用甲醇分别配成100 ug/mL的标准储备液。该溶液于-18℃保存。

4.9 1ug/mL氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考混合标准储备液：分别准确吸取1.00 mL氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考标准储备液(4.8)，移至100 mL容量瓶中，用甲醇配成1 ug/mL的氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考混合标准储备液。该溶液于-18℃保存。

4.10 1ug/mL氟苯尼考胺标准储备液：准确吸取1.00 mL氟苯尼考胺标准储备液(4.8)，移至100 mL容量瓶中，用甲醇配成1 ug/mL的氟苯尼考胺标准储备液。该溶液于-18℃保存。

4.11 20ng/mL氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考混合标准中间液：准确吸取 1.00 mL混合标准储备液(4.9)，移至50 mL容量瓶中，用水配成20 ng/mL的氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考混合标准中间液。该溶液于4℃保存。

4.12 20ng/ mL氟苯尼考胺标准中间液：准确吸取1.00 mL氟苯尼考胺标准储备液(4.10)，移至50 mL容量瓶中，用水配成20 ng/mL的氟苯尼考胺标准中间液。该溶液于4℃保存。

4.13 1ng/mL内标标准储备液：准确吸取1.00 uL内标标准液(4.7)，移至10 mL容量瓶中，用甲醇配成1ug/mL内标标准储备液。该溶液于-18℃保存。

4.14 20 ng/mL内标标准中间液：准确吸取1.00 mL内标标准储备液(4.13)，移至50 mL容量瓶中，用水配成20 ng/mL的内标标准中间液。该溶液于4℃保存。

4.15 氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考混合基质标准工作溶液：根据每种标准的灵敏度和仪器线性范围，临用时吸取一定量的混合标准中间液(4.11)和内标标准中间液(4.14)，用空白基质溶液配成适当浓度的混合基质标准工作液，每毫升该混合基质标准工作溶液含有0.15 ng氘代氯霉素(d₅-氯霉素)。

4.16 氟苯尼考胺基质标准工作溶液：根据标准的灵敏度和仪器线性范围，临用时吸取一定量的标准中间液(4.12)，用空白基质溶液配成适当浓度的氟苯尼考胺基质标准工作液。

4.17 滤膜：0.2 um；

5 仪器

5.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。

5.2 分析天平：感量0.1 mg和0.01 g。

5.3 离心机：转速≥4000r/min。

5.4 小型台式离心机：转速≥13000r/min。

5.5 组织捣碎机。

5.6 匀浆机。

5.7 减压旋转蒸发仪。

5.8 超声波水浴。

5.9 旋涡振荡器。

5.10 聚丙烯离心管：带盖，50 mL，1.5 mL。

5.11 鸡心瓶：25 mL。

5.12 具塞比色管：50mL。

文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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