1 范围

本标准规定了牛奶和奶粉中安乃近代谢物4-甲酰氨基安替比林(4-formylaminoantipyrine) ,4-乙酰氨基安替比林(4-acetylaminoantipyrine),4-甲基氨基安替比林(4-methylaminoantipyrine)和4-氨基安替比林(4-aminoantipyrine)的液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于牛奶和奶粉中4-甲酰氨基安替比林、4-乙酰氨基安替比林、4-甲基氨基安替比林和4-氨基安替比林残留量的测定。

本标准的方法检出限为：对于牛奶，4-甲酰氨基安替比林、4-氨基安替比林、4-甲基氨基安替比林和4-乙酰氨基安替比林均为5.0 ug/kg；对于奶粉，4-甲酰氨基安替比林、4-氨基安替比林、4-甲基氨基安替比林和4-乙酰氨基安替比林均为40.0 ug/kg。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分：总则与定义(GB/T 6379.1-2004,ISO 5725-1:1994,IDT)

GB/T 6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T6379.2-2004, ISO 5725-2:1994,IDT)

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-2008,ISO 3696:1987,MOD)

3 原理

牛奶和奶粉中安乃近代谢物残留加入Tris溶液后用乙腈提取，提取液经正己烷脱脂净化，液相色谱-串联质谱仪测定。4-乙酰氨基安替比林、4-甲酰氨基安替比林和4-氨基安替比林采用外标法定量，4-甲基氨基安替比林采用内标法进行定量。4 试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1甲醇：色谱纯。

4.2 异丙醇。

4.3 乙腈：色谱纯。

4.4 三羟甲基氨基甲烷(Tris)。

4.5 乙酸铵：色谱纯。

4.6 1.0mol/L Tris溶液：准确称取12.1g三羟甲基氨基甲烷，用水定容至100 mL。

4.7 样品定容溶液：甲醇-水(1-+19)。

4.8 5mmol/L乙酸铵溶液：准确称取0.385 g乙酸铵，用950 mL水溶解，用乙酸将溶液调至pH 3.0,再加水定容至1 000 mL。

4.9 4-甲基氨基安替比林(4-methylaminoantipyrine, C₁₂H₁₅N₃O, CAS; 519-98-2) , 4-乙酰氨基安替比林(4-acetylaminoantipyrine, C₁₃H₁₃N₃O₂,CAS: 83-15-8),4-甲酰氨基安替比林(4-formylaminoanti-pyrine,C₁₂H₁₃N₃O₂， CAS: 1672-58-8)和4-氨基安替比林(4-aminoantipyrine, C₁₁H₁₃N₃O,CAS: 83-07-8)标准物质：纯度≥99％。

4.10 内标标准物质：4-异丙基氨基安替比林(4-isopropylantipyrine,C₁₄H₁₉N₃O)，纯度≥99％。

4.11 100 mg/L标准储备溶液：准确称取适量的各种安乃近代谢物标准物质(4.9)，用甲醇(4.1)配制成浓度为100mg/L的标准储备溶液，避光-18℃保存。

4.12 1.0mg/L混合标准储备溶液：吸取每种适量标准储备溶液(4.11)，用甲醇稀释成1.0mg/L的混合标准工作溶液，避光-18℃保存。

4.13 100 mg/L内标储备溶液：准确称取适量的内标标准物质(4.10)用甲醇(4.1)配制成浓度为100mg/L标准储备溶液，避光-18℃保存。

4.14 1.0 mg/L内标工作溶液：吸取适量的内标储备溶液(4.13)，用甲醇稀释成1.0 mg/mL的内标标准工作溶液，避光-18℃保存。

4.15 基质混合标准工作溶液：吸取适量的混合标准储备溶液(4.12)和适量内标工作溶液(4.14)，用空白样品提取液配成浓度为1.0 ug/L、5.0ug/L、10.0ug/L、20.0ug/L、40.0ug/L、100ug/L和内标浓度为10.0 ug/L的基质混合标准工作溶液。当天配制。

4.16 滤膜：0.2um。

5 仪器和设备

5.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)。

5.2 旋转蒸发仪。

5.3 旋涡混匀器。

5.4 分析天平：感量0.1mg和0.01g。

5.5 移液器：10 uL～100uL和100uL～1000uL。

5.6 带刻度聚丙烯离心管：15 mL和50 mL，具塞。

5.7 低温离心机：转速大于5 000r/min，可制冷到4℃。

5.8 容量瓶：25 mL。

5.9 鸡心瓶。

相关链接：奶粉和牛奶中链霉素、双氢链霉素和卡那霉素残留量的测定（三）

文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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