1 范围

本标准规定了牛奶和奶粉中a-群勃龙、β-群勃龙、19-乙烯去甲睾酮和epi-19-乙烯去甲睾酮残留量的高效液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于牛奶和奶粉中a-群勃龙、β-群勃龙、19-乙烯去甲睾酮和epi-19-乙烯去甲睾酮残留量的测定和确证。

本标准方法的检出限：牛奶中a-群勃龙、β-群勃龙、19-乙烯去甲睾酮和epi-19-乙烯去甲睾酮为1 ug/kg，奶粉中a-群勃龙、β-群勃龙、19-乙烯去甲睾酮和epi-19-乙烯去甲睾酮为5 ug/kg。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分：总则与定义(GB/T 6379.1-2004,ISO 5725-1：1994,IDT)

GB/T 6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T 6379.2-2004,ISO 5725-2:1994,IDT)

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-2008,ISO 3696:1987,MOD)

3 原理

试样在pH5.0条件下加酶水解，乙腈-乙酸乙酯提取，凝胶色谱净化，用高效液相色谱-串联质谱测定，外标法定量。

4 试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为液相色谱纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1 乙腈。

4.2 乙酸乙酯。

4.3 环己烷。

4.4 甲醇。

4.5 乙酸。

4.6 无水硫酸钠，分析纯：经650℃灼烧4h，置于干燥器内备用。

4.7 乙酸钠，分析纯。

4.8 β-葡萄糖苷酸酶/芳基硫酸酯酶：β-glucuronidase/aryl sulfatase, 100 000 unit/mL。

4.9 0.02 mol/L 乙酸钠缓冲液(pH=5.0)：称取无水乙酸钠0.82g溶于500 mL水中，用乙酸调节pH=5.0。

4.10 甲醇溶液(7+3):30体积的水与70体积的甲醇混匀。

4.11 乙酸乙酯-环己烷(1+1):50体积的乙酸乙酯与50体积的环己烷混匀。

4.12 a-群勃龙(a-trenbolone, CAS: 80657-17-6),β-群勃龙(β-trenbolone, CAS: 10161-33-8)、19-乙烯去甲睾酮(nortestosterone, CAS: 434-22-0)和epi-19-乙烯去甲睾酮(epi-nortestosterone, CAS: 4409-34-1)标准品：纯度大于等于98％。

4.13 标准储备液：分别精确称取适量标准品，用乙腈配制成100 ug/mL的标准储备液。

4.14 混合标准中间工作液：取标准储备液(4.13)各1 mL至100 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成混合标准工作液，浓度为1 ug/mL。

4.15 滤膜：0.45um。

5 仪器和设备

5.1 高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)。

5.2 凝胶色谱仪。

5.3 分析天平：感量0.1mg和0.01g。

5.4 离心机。

5.5 恒温水浴摇床。

5.6 涡旋混和器。

5.7 旋转蒸发仪。

文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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