1 范围

本标准规定了原料乳和纯奶粉中氟胺烟酸(flunixin)残留量的液相色谱-紫外检测方法。

本标准适用于原料乳和纯奶粉中氟胺烟酸残留量的测定。

本标准的方法检出限：原料乳为5.0ug/L，纯奶粉为40ug/kg。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准。然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分：总则与定义(GB/T 6379.1-2004,ISO 5725-1：1994,IDT)

GB/T 6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T 6379.2-2004,ISO 5725-2:1994,IDT)

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-2008,ISO 3696:1987,MOD)

3 原理

样品在酸性条件下酶解用乙腈提取后，经正己烷和固相萃取柱净化，通过配置紫外检测器的高效液相色谱进行分析测定，外标法定量。

4 试剂和材料

除另有说明外，所有试剂均为分析纯。水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1 甲酸。

4.2 冰乙酸。

4.3 β-葡萄糖苷酸酶(β-glucuronidase)15000U/mL:β-葡萄糖苷酸酶(600000U/g)，准确称取0.0500g β-葡萄糖苷酸酶，加2 mL的磷酸盐(PBS)缓冲溶液溶解，用0.45um尼龙滤膜过滤。使用前现配制。

4.4 葡萄糖。

4.5 浓盐酸。

4.6 流动相A：乙酸铵0.05mol/L, pH5.0(准确称取3.90g乙酸铵，加水溶解并用甲酸调整至pH5.0，转移至1 000 mL容量瓶中，使用前过0.45um滤膜)。

4.7 流动相B：甲醇，色谱纯。

4.8 流动相C：乙腈，色谱纯。

4.9 混合流动相：将40 mL流动相B, 30 mL流动相C以及30 mL流动相A相混合。

4.10 磷酸盐(PBS)缓冲溶液：称取0.8g氯化钠，0.02g氯化钾，0.02g磷酸二氢钾，0.115g磷酸氢二钠和0.02g葡萄糖于250 mL烧杯中加约90 mL的水溶解，用0.1mol/L磷酸调整pH6.0，转移至100 mL容量瓶中并稀释至刻度。

4.11 85％磷酸。

4.12 乙酸钾溶液：0.04 mol/L。称取1.95g乙酸钾于500 mL容量瓶中，加约450 mL水溶解并稀释至刻度。

4.13 氯化钾。

4.14磷酸二氢钾。

4.15 磷酸二氢钾缓冲溶液：0.25 mol/L, PH7.0。称取17.01g磷酸二氢钾溶于400 mL水中，定容到500 mL，然后用0.25mol/L磷酸氢二钠调节pH至7.0(约500mL)，定容到1 L。

4.16 氯化钠。

4.17 无水磷酸氢二钠。

4.18 磷酸氢二钠溶液：0.25 mol/L。称取17.75g磷酸氢二钠溶于400 mL水中，定容到500 mL。

4.19 正己烷：色谱纯。

4.20 乙酸-正己烷溶液：乙酸＋正己烷(1+9)。

4.21 标准物质：氟胺烟酸葡甲胺盐，纯度≥99％。

4.22 氟胺烟酸标准储备溶液：50 ug/mL。称取适量的氟胺烟酸葡甲胺盐(4.21)，用甲醇溶解并定容。2℃～4℃下保存。

注：称取标准物的重量是按纯度和含盐量修正过的质量。

4.23 氟胺烟酸标准工作溶液：2ug/mL。吸取适量的氟胺烟酸标准储备溶液(4.22)，用甲醇配制成2 ug/mL的标准工作溶液，2℃～4℃下保存。

4.24 标准基质溶液：根据氟胺烟酸的灵敏度和仪器线性范围用空白样品提取液配制成不同浓度的标准基质溶液。