6 试样的制备与保存

6.1 牛奶

取均匀样品约250 g装入洁净容器作为试样，密封置4℃下保存，并标明标记。

6.2 奶粉

取均匀样品约250 g装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。

7 测定步骤

7.1 提取

牛奶样品称取5g(准确至0.01g)于50 mL具塞离心管中，奶粉样品称取1g(准确至0.01g)并加入5 mL水，往称取好的样品中加入25 uL 100 ng/mL内标混合液，混匀。

在称取好样品离心管中首先加入5 mL乙腈以沉淀蛋白，然后再加入20 mL乙酸乙酯，振荡提取2 min后，3000r/min离心10 min，移取上清液并通过5g无水硫酸钠过滤至鸡心瓶中。再用20 mL乙酸乙酯重复提取一次，合并上清液于同一鸡心瓶中。

7.2 净化

将提取液于45℃下旋转蒸发至约2 mL左右，然后转移到已活化的固相萃取柱上，再用5 mL乙酸乙酯洗涤鸡心瓶两次，洗液一并转移到固相萃取柱上，以小于2 mL/min流速滴下。接着依次用3 mL丙酮，3 mL甲醇，2 mL氨水-乙腈(5+95)淋洗，最后用5 mL氨水-乙腈(5+95)洗脱并收集(此过程流速小于2 mL/min)。洗脱液在45℃水浴上用氮气小心吹至近干，用水定容至1 mL,涡漩混合后，过0.45 um滤膜供HPLC-MS-MS分析。

7.3 空白基质溶液的制备

将取牛奶阴性样品5g，奶粉阴性样品1g(精确到0.01g)，按7.1和7.2操作。

7.4 测定条件

7.4.1 液相色谱参考条件

液相色谱参考条件如下：

a)色谱柱： C₁₈, 5 um,150 mm×2.1 mm(内径)或相当者；

b)色谱柱温度：30℃；

c)进样量：15 uL;

d)流动相梯度及流速见表1。

表1 液相色谱梯度洗脱条件

7.4.2 质谱参考条件

质谱参考条件如下：

a)离子化模式：电喷雾正离子模式(ESI+) ;

b)质谱扫描方式：多反应监测(MRM)；

c)鞘气压力：104 kPa;

d)辅助气压力：138 kPa;

e)正离子模式电喷雾电压(IS)：4000V;

f)毛细管温度：320℃;

g)源内诱导解离电压：10V;

h)Q1为0.4, Q3为0.7;

i)碰撞气：高纯氢气；

J)碰撞气压力：0.2Pa;

k)参考保留时间、监测离子对和裂解能量见表2。

表2 被测物的参考保留时间、监测离子对和裂解能量

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文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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