5 仪器

5.1 液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源。

5.2 离心机：最大转速为10000r/min。

5.3 离心管：锥形底玻璃离心管40 mL、15 mL和10 mL，具塞；锥形底聚丙烯离心管50 mL具螺旋盖。

5.4 电子天平：感量0.1mg和0.1g。

5.5 过滤器：聚四氟乙烯膜过滤器：0.22 um×13 mm；尼龙膜过滤器：0.22 um×47 mm。

5.6 移液器：量程为1mL～10mL和5 mL～50 mL。

5.7 微量加液器：量程为10uL～100uL,100 uL～1000uL。

5.8 流动相过滤装置。

5.9 氮气浓缩仪。

5.10 高速涡流混合器。

5.11 振荡器。

5.12 酸度计：精确度为±0.02。

5.13 超声波仪。

5.14 一次性注射器：1 mL。

5.15 固相萃取柱：Bond Flut C₁₈,500 mg，柱长为6 mL。

5.16 鸡心瓶：150 mL。

5.17 贮液器：100 mL。

5.18 试样瓶：2 mL。

5.19 一次性移液管。

5.20 滤纸。

6 试样的制备与保存

6.1 试样的制备

将原料乳和纯奶粉样品分别混合均匀。各自分出0.5 kg作为试样，将分出的试样密封，并作上标记。

6.2 试样保存

将试样置于4℃条件下贮存。

7 测定步骤

7.1提取

7.1.1 原料乳样品

称取原料乳5.00 mL，精确到0.01 mL，放入50 mL聚丙烯离心管中，加入10 mL的甲醇＋乙腈溶液(1+1)涡旋1 min，高速振荡10 min，离心15 min(5000r/min)，将上清液转移至40 mL离心管中。再向残渣中加入2 mL甲醇＋乙腈溶液(1+1)涡旋5s，高速振荡5 min，在5000r/min下离心10 min。合并两次上清液与40mL离心管中。加入15 mL的0.01mo1/L磷酸二氢铵溶液(4.9)，高速振荡5 min，以5000r/min离心10 min，用滤纸过滤至150 mL的鸡心瓶中，加入80 mL磷酸二氢铵缓冲液(4.9)混匀待净化。

7.1.2 纯奶粉样品

称取纯奶粉0.625g，精确到0.001g，放入50mL，聚丙烯离心管中加水4.375g，超声溶解得到复原乳。加入10 mL的甲醇+乙腈溶液(1+1)涡旋1 min，以下步骤同原料乳样品；

7.2 净化

依次用5 mL乙腈,5 mL水和5 mL的磷酸二氢铵(4.9)洗涤活化固相萃取柱(5.15)。在柱上装上贮液器(5.17)，将样液(7.1)过柱，移去贮液器(5.17)。依次用2 mL水，10 mL水＋乙腈溶液(4+1),2 mL水和10 mL水＋甲醇溶液(13+7)洗柱，弃去全部流出液。最后用5 mL水＋甲醇溶液(9+11)洗涤维吉尼霉素M₁，收集洗脱液到15 mL的玻璃离心管中。将10 mL三氯甲烷(4.5)加入洗脱液中，振荡5 min，离心10 min (5000 r/min)。用一次性移液管定量收集三氯甲烷层到10 mL离心管中，在40℃条件下氮吹至干。再向离心管中加入500uL甲醇，超声5 min，加入500 uL甲酸铵缓冲液(4.11)，高速涡旋5s。样液用0.2 um的滤膜过滤到样品瓶中，供液相色谱-串联质谱仪测定。

7.3 色谱测定

7.3.1 液相色谱条件

液相色谱条件如下：

a)色谱柱：SunFire C₁₈, 5 um, 150 mm× 2.1 mm(内径)或相当者；

b)柱温：40℃；

c)进样量：30uL；

d)色谱柱总流量：300uL/min;

e)流动相及梯度见表1。

表1 流动相及梯度

7.3.2质谱条件

质谱条件如下：

a)离子源：电喷雾离子源；

b)扫描方式：正离子扫描；

c)检测方式：多反应检测；

d)电喷雾电压(IS): 5000V;

e)雾化气压力(CAS1) : 517.1kPa;

f)气帘气压力(CUR): 103.4 kPa;

g)辅助气压力(CAS2) : 620.5 kPa;

h)离子源温度(TEM) :700℃；

i)定性离子对、定量离子对，采集时间(Dwell)，去簇电压(DP) ,碰撞气能量(CE)、入口电压(EP)，及碰撞室出口电压(CXP)见表2。

表2 维吉尼霉素M₁的质谱参数

文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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