1 范围

本标准规定了牛奶和奶粉中玉米赤霉醇(zearalanol)、玉米赤霉酮(zearalanone)、己烯雌酚(dieth-ylstilhestrol)、己烷雌酚(hexestrol)、双烯雌酚(dieno-estrol)残留量液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准用于牛奶和奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、己烷雌酚、双烯雌酚残留量的测定。

本标准方法检出限：牛奶中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烷雌酚、己烯雌酚和双烯雌酚为1.0ug/L;奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烷雌酚、己烯雌酚和双烯雌酚为8.0ug/kg。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分：总则与定义(GB/T 6379.1-2004，ISO 5725-1:1994,IDT)

GB/T 6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T 6379.2-2004,ISO 5725-2:1994,IDT)

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-2008,ISO 3696:1987,MOD

3 原理

用乙腈作为蛋白沉淀剂和提取剂进行提取，阴离子固相萃取柱进行净化，用液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。

4 试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯。

4.1 水：GB/T 6682，一级。

4.2 甲醇：色谱纯。

4.3 乙腈：色谱纯。

4.4 氨水。

4.5 甲酸。

4.6 氢氧化钠。

4.7 5 mol/L氢氧化钠溶液：称取200 g氢氧化钠，用蒸馏水定容到1 L。

4.8 淋洗液：氨水-水(1+19)。

4.9 洗脱液：甲酸-甲醇(1+19)。

4.10 激素及代谢物标准物质：玉米赤霉醇(包括a-玉米赤霉醇和件玉米赤霉醇，各50％)纯度大于等于97％；玉米赤霉酮，纯度大于等于97%；己烯雌酚，纯度大于等于99％；己烷雌酚，纯度大于等于98％；双烯雌酚，纯度大于等于98%。

4.11 标准溶液：分别准确称取适量的玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、双烯雌酚和己烷雌酚标准物质，用甲醇(4.2)配制成1 mg/mL标准贮备溶液。再根据需要以甲醇配制成不同浓度的混合标准溶液作为标准工作溶液，保存于4℃冰箱中。

4.12 内标标准物质：a-玉米赤霉烯醇-4氘代，纯度大于等于99％；己烯雌酚-8氘代，纯度大于等于98％。

4.13内标标准溶液：准确称取适量玉米赤霉烯醇-4氘代和己烯雌酚-8氘代标准物质，用甲醇(4.2)分别配制成1 mg/mL标准贮备溶液。再以甲醇稀释成适用浓度的混合内标工作溶液，保存于4℃冰箱中。

4.14 基质提取液：空白样品，除不加入标准工作溶液(4.11)和内标工作溶液(4.13)外，其他操作同7.1.1及7.1.2处理后得到的溶液。

4.15 基质标准工作溶液：将标准工作溶液(4.11)及内标工作溶液(4.13)混合后在氮吹仪中吹干，以基质提取液(4.14)溶解，涡旋30 s后即为基质标准工作溶液。

4.16 Oasis MAX阴离子固相萃取柱或相当者：60 mg, 3 mL。

4.17滤膜：0.2um。

5 仪器

5.1 液相色谱-串联质谱联用仪：配有电喷雾电离源：

5.2 自动固相萃取仪或固相萃取装置。

5.3 氮气吹干仪。

5.4 涡旋振荡器。

5.5 离心机：转速大于3500r/min,,

5.6 高速离心机：转速大于9000r/min，温度可控制在4℃。

6 试样的制备

6.1 牛奶

取50 mL新鲜或解冻的牛奶混合均匀，3500r/min离心5 min，取下层。

6.2 奶粉

取12. 5 g奶粉于烧杯中，加适量35℃～50℃水将其慢慢溶解，转移至100 mL容量瓶中，待冷却至室温，用水定容混匀。取50mL，以3500r/min离心5 min，取下层。

文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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