6 试样的制备与保存

6.1 试样的制备

将牛奶和奶粉样品分别混合均匀。各自分出0.5 kg作为试样，将分出的试样密封，并作上标记。

6.2 试样保存

将试样置于4℃条件下贮存。

7 测定步骤

7.1 提取

7.1.1 牛奶样品

称取牛奶试样2.00 mL精确到0.01mL，放入50 mL聚丙烯离心管中，加入200 uL乙腈进行涡流混合，混合后加入400 uL 5 mol/L氢氧化钠溶液，并进行涡流混合30 s。在80℃±5℃水浴中放置1h。在此期间，要对每个测定样品进行两次涡流混合。1h后，将样品从水浴中取出并冷却至室温。加入12 mL特丁基甲醚，置于振荡器上高速振荡13 min，离心15min转速为5000r/min)。吸出上清液，将特丁基甲醚定量转移到干净的15 mL的玻璃离心管内，待净化。

7.1.2 奶粉样品

称取奶粉样品0.25g(精确到0.01g)，放入50 mL聚丙烯离心管中，加入1.75 g水超声溶解得到复原乳，加入200 uL乙腈，以下步骤同7.1.1。

7.2 净化

在上述15 mL离心管中加入1 mol/L磷酸二氢钾溶液(pH=3.0)3mL，振荡10 min，离心10 min(5000r/min)。将特丁基甲醚层吸出弃去。在磷酸盐溶液中加入2 mL特丁基甲醚，振荡5 min，离心5 min(5000r/min)，吸出特丁基甲醚层弃去。然后再在磷酸盐缓冲溶液中加入2 mL特丁基甲醚重复上述步骤。加入1 mL 5 mol/L氢氧化钠溶液摇匀后加入10 mL特丁基甲醚，振荡15 min，离心5 min(5000 r/min)。定量吸取特丁基甲醚转移到一个干净的10 mL的离心管中。在40℃条件下用氮吹仪蒸发至干。在浓缩至干的提取物中加入1000uL流动相溶液(4.17)，进行涡流混合，超声处理10 min用0.2um×13mm的聚四氟乙烯注射式过滤器过滤样液，将样液转移到试样瓶中，供液相色谱-串联质谱测定。

7.3 色谱测定

7.3.1 液相色谱参考条件

液相色谱参考条件如下：

a)色谱柱：Inertsil ODS-3,5um,150 mm×2.1mm(内径)或相当者；

b)柱温：35℃；

e)进样量：20 uL;

d)色谱柱总流量：200 uL/min;

e)流动相及梯度见表1。

表1 流动相及梯度

7.3.2 质谱参考条件

质谱参考条件如下：

a)离子源：电喷雾离子源；

b)扫描方式：正离子扫描；

e)检测方式：多反应检测(MRM) ;

d)电喷雾电压(IS): 5000V;

e)雾化气压力(CAS1) : 482.6 kPa;

f)气帘气压力(CUR) :68.9 kPa;

g)辅助气压力(CAS2) :482. 6kPa;

h)离子源温度(TEM) : 700℃；

i)接口加热(ihe):ON;

j)定性离子对、定量离子对、采集时间(Dwell)、去簇电压(DP)、碰撞气能量(CE)、入口电压(EP)及碰撞室出口电压(CYP)见表2。

表2 八种镇定剂的质谱参数

文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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