一、案例

食品的脂肪在长期储存中其质量会逐渐变坏，这种变化即为油脂的酸败。油脂酸败的主要原因是油脂自身的氧化。为了防止油脂自身的氧化作用，常在油脂或含脂肪较高的食品中加入一些抗氧化剂。叔丁基羟基茴香醚(BHA)与2，6二叔丁基对甲酚(BHT)是两种最常用的人工合成抗氧化剂。我国《食品添加剂使用卫生标准》规定，BHA和BHT在油脂、油炸食品、干鱼制品、饼干、速煮面、干制食品和罐头等中，允许的最大使用量为0．2g／kg，BHA和BHT混合使用时，总量不能超过0.2g／kg。

二、选用的国家标准

GB／T 5009．30 2003食品中叔丁基羟基茴香醚(BHA)与2，6一二叔丁基对甲酚(BHT)的测定——气相色谱法。

三、测定方法

1．样品处理

(1)样品的制备称取500g含油脂较多的样品，含油脂少的样品取1000g，然后用对角线取2／4或2／6或根据样品情况取有代表性的样品，在玻璃乳钵中研碎，混合均匀后放置于广口瓶内保存于冰箱中。

(2)脂肪的提取

①含油脂高的样品(如桃酥等)称取50g，混合均匀，置于250ml具塞锥形瓶中，加50mL石油醚(沸程为30～60℃)，放置过夜，用快速滤纸过滤后，减压回收溶剂，残留脂肪备用。

②含油脂中等的样品(如蛋糕、江米条等)称取100g左右，混合均匀，置于500mL具塞锥形瓶中，加100～200ml石油醚(沸程为30～60℃)，放置过夜，用快速滤纸过滤后，减压回收溶剂，残留脂肪备用。

③含油脂少的样品(如面包、饼干等)称取250～300g，混合均匀后，于500ml,具塞锥形瓶中，加入适量石油醚浸泡样品，放置过夜，用快速滤纸过滤后，减压回收溶剂残留脂肪备用。

2．试样制备

(1)色谱柱的制备 于色谱柱底部加入少量玻璃棉，少量无水硫酸钠，将硅胶弗罗里矽土(6+4)共10g，用石油醚湿法混合装柱，柱顶部再加入少量无水硫酸钠。

(2)试样的制备称取上述制备的脂肪0.50～1.OOg，用25µL石油醚溶解移入上述色谱柱上，再以100mL二氯甲烷分五次淋洗，合并淋洗液，减压浓缩近干时，用二硫化碳定容至2.OmL，该溶液为待测溶液。

(3)植物油试样的制备 称取混合均匀样品2.OOg，放入50mL烧杯中，加30mL石油醚溶解，转移到上述色谱柱上，再用10mL石油醚分数次洗涤入烧杯中，并转移到色谱柱上，用1.0mL二氯甲烷分五次淋洗，合并淋洗液，减压浓缩近干，用二硫化碳定容至2．OmL，该溶液为待测溶液。

3．测定

①注入气相色谱3.0µL标准使用液，绘制色谱图，分别量取各组分峰高或峰面积，进3µL试样待测溶液(应视试样含量而定)，绘制色谱图，分别量取峰高或峰面积，与标准峰高或峰面积比较计算含量。

②气相色谱参考条件如下。

色谱柱：长1.5m、内径3mm的玻璃柱，质量分数为10％QF—l的GaschromQ(80～100目)。

检测器：FID。 温度：检测室200℃，进样口200℃，柱温140℃。载气流量：氮气70mL／min；氢气50mL／min；空气500mL／min。

4．结果计算

待测溶液BHA(或BHT)的质量按下式进行计算。

m_i=h_i/H_s*V_m/V_i*V_s*C_s

式中 m_i——待测溶液BHA(或BHT)的质量，mg；

h_i——注入色谱试样中BHA(或BHT)的峰高或峰面积；

H_s——标准使用液中BHA(或BHT)的峰高或峰面积；

V_i——注入色谱试样溶液的体积，mL；

V_m——待测试样定容的体积，mL；

V_s——注入色谱中标准使用液的体积，ml；

C_s——标准使用液的浓度，mg／mL。

食品中以脂肪计的BHA(或BHT)的含量按下式进行计算。

X=m₁*1000/m₂*1000

式中 X——食品中以脂肪计的BHA(或BHT)的含量，g／kg；

m₁——待测溶液中BHA(或BHT)的质量，mg；

m₂——油脂(或食品中脂肪)的质量，g。

5．试剂

①石油醚：沸程30～60℃。

②二氯甲烷：分析纯。

③二硫化碳：分析纯。

④无水硫酸钠：分析纯。

⑤硅胶G：60～80目于120℃活化4h放入干燥器内备用。

⑥弗罗里矽土(F1orisil)：60～80目于120℃活化4h放入干燥器中备用。

⑦BHA、BHT混合标准储备液：准确称取BHA、BHT(纯度为99.0％)各0.1g混合后用二硫化碳溶解，定容至100mL容量瓶中，此溶液分别为每毫升含1.Omg BHA、BHT，置于冰箱中保存。

⑧BHA、BHT混合标准使用液：吸取标准储备液4.OmL于100mL容量瓶中，用二硫化碳定容至100mL，此溶液分别为每毫升含O.040mg BHA、BHT，置于冰箱中保存。

6．仪器

①气相色谱仪：附FID检测器。

②蒸发器：容积200mL。

③振荡器。

④色谱柱：1cm×30cm玻璃柱，带活塞。

⑤气相色谱柱：柱长1.5m、内径3mm的玻璃柱内装涂质量分数为10％的QF一1GasChrom Q(80～100目)。